TGF-β（transformation growth factor-β,TGF-β）超家族在脊椎動物的生殖、發(fā)育、生長等方面都有著重要的作用,Gsdf是TGF-β超家族的新成員,其僅僅在魚類中存在,并且在大多數(shù)的硬骨魚類的性腺中特異性表達(dá),成為魚類性別決定基因研究的一個強(qiáng)有力的候選基因,因此本實(shí)驗(yàn)對黃河鯉中Gsdf基因從結(jié)構(gòu)到功能進(jìn)行了初步的研究。本研究首先從實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的黃河鯉（Cyprinus carpio var）轉(zhuǎn)錄組庫中篩選出Gsdf基因序列,之后通過DNAman比對、Blast搜索、PCR測序驗(yàn)證等方法確定2個正確的全長序列:Gsdf1,全長1444 bp,編碼154個氨基酸,有TGF-β結(jié)構(gòu)域以及8個保守的半胱氨酸殘基,含有4個外顯子和3個內(nèi)含子;Gsdf2,全長1355 bp,編碼191個氨基酸,有TGF-β結(jié)構(gòu)域以及8個保守的半胱氨酸殘基,含有5個外顯子和4個內(nèi)含子。氨基酸序列比對結(jié)果顯示黃河鯉的Gsdf1、Gsdf2和斑馬魚（Barchydanio rerio var）的Gsdf相似性最高,分別為49.3%和57.0%,但是和紅鰭東方鲀（Takifugu rubri... 

【文章來源】：河南師范大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 魚類的性別決定
        1.1.1 魚類的性染色體類型
        1.1.2 魚類的性別決定的相關(guān)環(huán)境因素
        1.1.3 魚類的性別決定基因
    1.2 Gsdf(gonadal soma-derived factor)的研究進(jìn)展
        1.2.1 TGF-β超家族的概述
        1.2.2 Gsdf的結(jié)構(gòu)
        1.2.3 Gsdf的功能研究
    1.3 MicroRNA的研究進(jìn)展
        1.3.1 miRNA的概述
        1.3.2 miRNA與靶基因的相互作用機(jī)制
        1.3.3 miR-22的研究進(jìn)展
        1.3.4 miR-210的研究進(jìn)展
    1.4 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物-黃河鯉
        2.1.2 細(xì)胞系、宿主菌株和載體質(zhì)粒
        2.1.3 儀器設(shè)備
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 主要溶液的配制
        2.1.6 實(shí)驗(yàn)中所用引物
    2.2 方法
        2.2.1 Gsdfs基因的生物信息學(xué)分析
        2.2.2 RNA的提取和c DNA的合成
        2.2.3 Quantitative real-time PCR(qRT-PCR)及數(shù)據(jù)分析
        2.2.4 原位雜交
        2.2.5 miRNA與靶基因關(guān)系的驗(yàn)證
        2.2.6 黃河鯉Gsdf1多克隆抗體的制備
        2.2.7 miRNA mimics對離體性腺中Gsdf1表達(dá)的影響
        2.2.8 統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 黃河鯉Gsdfs基因的生物信息學(xué)分析
        3.1.1 Gsdfs基因的序列的驗(yàn)證
        3.1.2 Gsdfs基因的序列分析
        3.1.3 Gsdfs基因氨基酸序列同源性分析
        3.1.4 Gsdfs基因染色體同線性分析
        3.1.5 Gsdfs基因轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)分析
    3.2 黃河鯉Gsdfs基因表達(dá)模式分析
        3.2.1 黃河鯉Gsdfs基因在胚胎中的表達(dá)模式
        3.2.2 Gsdfs基因的時空表達(dá)模式
    3.3 黃河鯉Gsdfs基因表達(dá)定位分析
        3.3.1 黃河鯉Gsdfs mRNA在成熟性腺中的定位
        3.3.2 黃河鯉Gsdfs mRNA胚胎整體原位雜交結(jié)果
    3.4 miRNA與Gsdf1基因靶標(biāo)關(guān)系的驗(yàn)證
        3.4.1 miRNA與Gsdf1基因靶標(biāo)關(guān)系的離體驗(yàn)證
        3.4.2 Gsdf1基因與miRNA表達(dá)相關(guān)性分析
        3.4.3 miRNA mimics對離體性腺中Gsdf1表達(dá)的影響
4 討論
    4.1 黃河鯉Gsdfs基因的生物信息學(xué)分析
    4.2 黃河鯉Gsdfs基表達(dá)模式及功能預(yù)測
    4.3 黃河鯉中miRNA與Gsdf1基因靶標(biāo)關(guān)系的驗(yàn)證
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]雙熒光素酶報告基因檢測miR-185與AKT1靶標(biāo)關(guān)系[D]. 曹大龍.蚌埠醫(yī)學(xué)院 2015
[2]羅非魚gsdf在性腺的表達(dá)及其在性別決定中的功能[D]. 楊惠惠.西南大學(xué) 2014



本文編號：3180805