凋亡是有機(jī)體細(xì)胞自主程序性死亡方式之一,是生物體正常的生理機(jī)能。再生主要指生物體組織或器官遭受損傷后,重建恢復(fù)的過程。淡水渦蟲具有較強(qiáng)的再生能力,但是,細(xì)胞凋亡在渦蟲組織再生過程中的作用以及兩者之間關(guān)系報(bào)道較少。本文以再生能力較強(qiáng)的日本三角渦蟲（Dugesia japonica）為實(shí)驗(yàn)材料,從轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)選擇了4個(gè)凋亡基因DjCasp3a、DjCasp3b、DjCasp3c和DjCasp8a,利用多種生物學(xué)軟件對(duì)4個(gè)基因及其編碼蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析;利用Real-time PCR、RNAi、TUNEL染色、H3P免疫熒光等分子生物學(xué)技術(shù),對(duì)4基因在整體渦蟲及再生過程的作用進(jìn)行了研究。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明:DjCasp3a和DjCasp3c編碼的凋亡蛋白均含有保守的五肽序列QACRG,DjCasp3b和DjCasp8a編碼的凋亡蛋白五肽序列分別為QACKG和DACRG。4基因編碼蛋白均為親水性穩(wěn)定蛋白;沒有跨膜結(jié)構(gòu)和分泌信號(hào)肽,因此都不屬于膜蛋白及分泌蛋白;亞細(xì)胞定位顯示它們均位于細(xì)胞質(zhì)中。Real-time PCR結(jié)果表明:在渦蟲再生過程中4基因呈動(dòng)態(tài)表達(dá),在再生3小時(shí),DjCas... 

【文章來源】：河南師范大學(xué)河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 渦蟲概述
    1.2 渦蟲再生的方式
    1.3 細(xì)胞凋亡及其相關(guān)的酶
    1.4 細(xì)胞凋亡途徑
    1.5 凋亡在渦蟲中研究進(jìn)展
    1.6 細(xì)胞凋亡與細(xì)胞增殖的關(guān)系
    1.7 立題依據(jù)及意義
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 實(shí)驗(yàn)所用引物
    2.3 基因克隆及RNAi喂食方法
    2.4 RNA提取和Real-time PCR
    2.5 原位雜交、TUNEL染色和H3P免疫熒光
    2.6 生物信息學(xué)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 凋亡蛋白Caspase家族基因生物信息學(xué)分析
        3.1.1 DjCasp3a生物信息學(xué)分析
        3.1.2 DjCasp3b生物信息學(xué)分析
        3.1.3 DjCasp3c生物信息學(xué)分析
        3.1.4 DjCasp8a生物信息學(xué)分析
        3.1.5 DjCasp3 基因同源性分析
    3.2 四凋亡基因在再生期間表達(dá)模式
        3.2.1 DjCasp3a在渦蟲再生過程中的表達(dá)模式
        3.2.2 DjCasp3b在渦蟲再生過程中的表達(dá)模式
        3.2.3 DjCasp3c在渦蟲再生過程中的表達(dá)模式
        3.2.4 DjCasp8a在渦蟲再生過程中的表達(dá)模式
        3.2.5 四凋亡基因在再生過程中的表達(dá)趨勢(shì)
    3.3 四凋亡基因整體原位雜交
    3.4 RNA干擾喂食策略及干擾效果檢測(cè)
        3.4.1 喂食策略
        3.4.2 四凋亡基因干擾效果檢測(cè)
    3.5 四基因RNA干擾結(jié)果
        3.5.1 DjCasp3a RNA干擾后渦蟲形態(tài)變化
        3.5.2 DjCasp3a RNA干擾后渦蟲標(biāo)記基因檢測(cè)
        3.5.3 DjCasp3b RNA干擾后渦蟲形態(tài)變化
        3.5.4 DjCasp3b RNA干擾后渦蟲標(biāo)記基因檢測(cè)
        3.5.5 DjCasp3c RNA干擾后渦蟲形態(tài)變化
        3.5.6 DjCasp3c RNA干擾后渦蟲標(biāo)記基因檢測(cè)
        3.5.7 DjCasp8a RNA干擾后渦蟲形態(tài)變化
        3.5.8 DjCasp8a RNAi渦蟲標(biāo)記基因檢測(cè)
    3.6 日本三角渦蟲TUNEL檢測(cè)
        3.6.1 正常渦蟲TUNEL檢測(cè)
        3.6.2 凋亡基因干擾后整體渦蟲TUNEL檢測(cè)
        3.6.3 干擾渦蟲切割后3 小時(shí)TUNEL檢測(cè)
        3.6.4 干擾渦蟲切割后72 小時(shí)TUNEL檢測(cè)
    3.7 四基因干擾后整體渦蟲H3P免疫熒光
        3.7.1 干擾渦蟲整體H3P檢測(cè)
        3.7.2 干擾渦蟲切割后3 小時(shí)H3P檢測(cè)
        3.7.3 四基因干擾渦蟲切割后72 小時(shí)H3P檢測(cè)
第四章 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]日本三角渦蟲無性繁殖系Dugesia ZB-1的建立[J]. 徐振彪,韓亞紅,宋林霞.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào). 2017(02)
[2]體外培養(yǎng)狀態(tài)下心肌細(xì)胞有絲分裂的證據(jù)[J]. 李辭霞,盧杏,郭志坤.  解剖學(xué)報(bào). 2015(01)
[3]細(xì)胞凋亡途徑及其機(jī)制[J]. 李敏,林俊.  國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志. 2014(02)
[4]Caspase-3細(xì)胞定位信號(hào)的檢測(cè)與分析[J]. 盧智勇,盧智剛,曾昭淳.  中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2008(06)
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[6]死亡底物PARP與細(xì)胞凋亡[J]. 賽燕.  免疫學(xué)雜志. 2002(S1)
[7]Caspase-3與細(xì)胞凋亡的研究[J]. 張曉田.  醫(yī)學(xué)綜述. 2002(11)

博士論文
[1]日本三角渦蟲Neurotrophin信號(hào)通路關(guān)鍵基因及flotillins基因的克隆及功能分析[D]. 程方方.河南師范大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3179171