黏蟲（Mythimna separata（Walker））屬于鱗翅目夜蛾科昆蟲,它是我國(guó)重要的農(nóng)業(yè)害蟲之一。目前對(duì)于黏蟲的防治主要依靠化學(xué)農(nóng)藥的方法,但不合理的化學(xué)防治不僅會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染,使黏蟲產(chǎn)生抗藥性,而且會(huì)對(duì)非靶標(biāo)生物造成傷害。對(duì)于解決該難題來(lái)說(shuō),利用基因工程的手段進(jìn)行生物防治是目前最為環(huán)保有效的措施之一。圍食膜是黏蟲抵御外界侵害的重要的天然屏障,其主要成份是幾丁質(zhì)、蛋白質(zhì)和多糖,它具有保護(hù)中腸上皮細(xì)胞不受機(jī)械損傷,以及抵御病毒、細(xì)菌及其他有害物質(zhì)入侵的作用。幾丁質(zhì)脫乙�；福–DAs）是黏蟲體內(nèi)促進(jìn)幾丁質(zhì)降解為殼聚糖的一類水解酶,當(dāng)CDAs基因在蟲體中不表達(dá)時(shí),就會(huì)抑制殼聚糖的合成從而改變圍食膜的結(jié)構(gòu)使黏蟲不能正常生長(zhǎng)發(fā)育。通過(guò)對(duì)幾丁質(zhì)脫乙�；腹δ艿难芯�,不僅使得幾丁質(zhì)降解過(guò)程更加明確,也為研究利用生物技術(shù)方法防治害蟲提供了重要的理論依據(jù)。基于此,本研究通過(guò)高通量測(cè)序的方法在黏蟲體內(nèi)獲得MsCDA1基因,通過(guò)生物信息學(xué)分析、熒光定量PCR檢測(cè)、MsCDA1基因的表達(dá)模式分析、RNA干擾、掃描電鏡檢測(cè)等試驗(yàn),以從分子水平上揭示幾丁質(zhì)脫乙�；傅幕蚬δ�、深入探索其在黏蟲幾丁質(zhì)... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 黏蟲簡(jiǎn)介
    1.2 昆蟲幾丁質(zhì)的研究
        1.2.1 昆蟲幾丁質(zhì)的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 昆蟲幾丁質(zhì)結(jié)構(gòu)
    1.3 CDA的發(fā)現(xiàn)及在昆蟲中的作用
        1.3.1 CDA的發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用
        1.3.2 昆蟲CDA的種類
        1.3.3 CDA參與昆蟲的幾丁質(zhì)降解
        1.3.4 昆蟲CDA的克隆及表達(dá)活性檢測(cè)
        1.3.5 CDA對(duì)昆蟲圍食膜的影響
    1.4 CDA對(duì)昆蟲蛻皮的影響
    1.5 研究目的與意義
    1.6 技術(shù)路線
2 材料和方法
    2.1 試驗(yàn)材料及儀器
        2.1.1 試劑選擇
        2.1.2 昆蟲飼養(yǎng)
        2.1.3 儀器設(shè)備
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 黏蟲RNA的提取
        2.2.2 第一條鏈cDNA的合成
        2.2.3 MsCDA1特性的研究
        2.2.4 熒光定量PCR
        2.2.5 MsCDA1基因的RNAi沉默的研究
        2.2.6 掃描電鏡操作方法
3 結(jié)果與分析
    3.1 MsCDA1基因生物信息學(xué)分析
    3.2 預(yù)測(cè)MsCDA1蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)
    3.3 預(yù)測(cè)MsCDA1蛋白質(zhì)跨膜區(qū)域
    3.4 系統(tǒng)進(jìn)化分析
    3.5 MsCDA1與其它物種的同源性比對(duì)
    3.6 黏蟲幾丁質(zhì)脫乙�；柑匦缘难芯�
        3.6.1 MsCDA1基因在不同發(fā)育階段的表達(dá)模式分析
        3.6.2 MsCDA1基因在不同組織中的表達(dá)模式分析
        3.6.3 RNAi處理的黏蟲MsCDA1表達(dá)模式分析
    3.7 掃描電鏡觀察圍食膜結(jié)構(gòu)
4 討論
    4.1 MsCDA1基因的克隆與序列分析
    4.2 MsCDA1生物學(xué)特性的分析
    4.3 MsCDA1基因RNA干擾的研究
    4.4 MsCDA1基因沉默后對(duì)圍食膜的影響
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小地老虎幾丁質(zhì)脫乙�；富虻目寺∨c原核表達(dá)[J]. 樊東,郭博智,高艷玲,趙奎軍,王曉云.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(04)
[2]殺蟲單與有機(jī)磷殺蟲劑混配對(duì)粘蟲的增效作用研究[J]. 裴暉,歐曉明,王永江,喻快,林雪梅.  新農(nóng)藥. 2006(01)
[3]昆蟲病毒增效劑研究進(jìn)展[J]. 郭慧芳,方繼朝,韓召軍.  昆蟲學(xué)報(bào). 2003(06)
[4]昆蟲幾丁質(zhì)酶作為生防措施促進(jìn)因子的應(yīng)用前景[J]. 彭宇,王蔭長(zhǎng).  世界農(nóng)藥. 2002(01)
[5]低溫和幾丁質(zhì)酶處理對(duì)棉鈴蟲圍食膜的影響[J]. 張嚴(yán)峻,譚軍,林玉清.  中國(guó)生物防治. 2000(04)
[6]廣東剃枝蟲種類及其發(fā)生情況的調(diào)查[J]. 吳榮宗.  植物保護(hù)學(xué)報(bào). 1963(03)

碩士論文
[1]小麥條銹菌細(xì)胞壁相關(guān)基因的寄主誘導(dǎo)轉(zhuǎn)基因沉默研究[D]. 劉強(qiáng).山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3174334