【目的】對(duì)暴馬桑黃中參與三萜合成途徑的關(guān)鍵酶——甲羥戊酸焦磷酸脫羧酶（MVD）基因進(jìn)行克隆及表達(dá)特性分析,以了解暴馬桑黃三萜合成的調(diào)控機(jī)制。【方法】利用生物信息學(xué)軟件對(duì)MVD基因cDNA序列進(jìn)行分析,并采取同源重組方法構(gòu)建原核表達(dá)載體。用qRT-PCR技術(shù)分析MVD基因在暴馬桑黃不同發(fā)育階段表達(dá)特性;以分光光度計(jì)法測(cè)定暴馬桑黃在不同發(fā)育階段的三萜含量和變化規(guī)律。【結(jié)果】暴馬桑黃MVD基因cDNA序列全長(zhǎng)1 209 bp,編碼402個(gè)氨基酸,相對(duì)分子質(zhì)量為43.43 ku,命名為SbMVD（登錄號(hào)為MK977617）。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)表明:暴馬桑黃MVD蛋白和紫芝、灰樹(shù)花MVD蛋白同源性最高。SDS-PAGE結(jié)果顯示:在65 ku（包含21 ku標(biāo)簽蛋白）附近出現(xiàn)與預(yù)期大小一致的目的蛋白條帶。qRT-PCR分析及三萜含量測(cè)定結(jié)果表明:暴馬桑黃SbMVD基因轉(zhuǎn)錄水平和三萜含量在不同發(fā)育階段呈先升后降的變化趨勢(shì),并且兩者變化趨勢(shì)基本一致。【結(jié)論】通過(guò)對(duì)SbMVD基因的克隆及表達(dá)特性分析,推測(cè)該基因在三萜合成途徑中發(fā)揮一定作用,為進(jìn)一步研究該基因在暴馬桑黃三萜合成過(guò)程中的功能奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,44(04)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株和載體
    1.2 試驗(yàn)試劑
    1.3 實(shí)驗(yàn)引物
    1.4 SbMVD基因克隆
    1.5 SbMVD基因序列分析
    1.6 原核表達(dá)載體構(gòu)建
    1.7 SbMVD基因的誘導(dǎo)表達(dá)及檢測(cè)
    1.8 熒光定量分析及三萜含量測(cè)定
        1.8.1 材料收集
        1.8.2 SbMVD基因轉(zhuǎn)錄水平分析
        1.8.3 三萜含量測(cè)定
2 結(jié)果與分析
    2.1 SbMVD基因克隆
    2.2 SbMVD基因序列及蛋白結(jié)構(gòu)特征
        2.2.1 SbMVD基因序列
        2.2.2 SbMVD蛋白跨膜區(qū)預(yù)測(cè)
        2.2.3 SbMVD蛋白信號(hào)肽預(yù)測(cè)
        2.2.4 SbMVD蛋白高級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        2.2.5 系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建
    2.3 重組質(zhì)粒的獲得
    2.4 SbMVD基因原核表達(dá)
    2.5 SbMVD基因轉(zhuǎn)錄水平與三萜含量的變化
        2.5.1 不同發(fā)育階段SbMVD基因轉(zhuǎn)錄水平的變化
        2.5.2 不同發(fā)育階段暴馬桑黃三萜含量的變化
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黑木耳內(nèi)切葡聚糖酶基因克隆與原核表達(dá)[J]. 孫健,孫婷婷,王旭彤,鄒莉.  吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(03)
[2]滇重樓甲羥戊酸焦磷酸脫羧酶基因的分子克隆與分析[J]. 楊莉,樊小莉,劉琴,王芳,劉靜,徐智斌,馮波,周強(qiáng),王濤.  中草藥. 2019(06)
[3]洋常春藤甲羥戊酸焦磷酸脫羧酶基因HhMVD的克隆與表達(dá)分析[J]. 孫化鵬,鐘曉紅,喬飛.  熱帶作物學(xué)報(bào). 2018(11)
[4]茶樹(shù)甲羥戊酸焦磷酸脫羧酶基因CsMVD的克隆與表達(dá)分析[J]. 王鵬杰,陳丹,曹紅利,陳靜,陳笛,葉乃興.  西北植物學(xué)報(bào). 2017(12)
[5]金釵石斛焦磷酸甲羥戊酸脫羧酶基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 李清,李標(biāo),郭順星.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2018(02)
[6]重瓣百合LiSEP3基因克隆與表達(dá)分析[J]. 隋娟娟,李曉昕,楊秋燕,吳澤,曹興,何俊娜,義鳴放.  南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2017(01)
[7]鮑姆纖孔菌總?cè)频奶崛〖捌潴w外抗乳腺癌細(xì)胞MCF-7活性[J]. 張林芳,孫婷婷,鄒莉.  藥物評(píng)價(jià)研究. 2015(05)
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[9]刺五加甲羥戊酸焦磷酸脫羧酶基因的克隆與表達(dá)分析[J]. 邢朝斌,龍?jiān)录t,何閃,周秘,修樂(lè)山.  西北植物學(xué)報(bào). 2012(10)

博士論文
[1]桑黃三萜生物合成途徑關(guān)鍵酶基因的挖掘及分析[D]. 孫婷婷.東北林業(yè)大學(xué) 2017
[2]人參皂苷生物合成關(guān)鍵酶基因MVD和βAS的克隆及βAS的反義表達(dá)[D]. 侯春喜.吉林大學(xué) 2009

碩士論文
[1]藥用真菌桑黃化學(xué)成分的研究[D]. 丁云云.安徽醫(yī)科大學(xué) 2017
[2]靈芝甲羥戊酸焦磷酸脫羧酶基因的克隆及表達(dá)特性研究[D]. 秦磊.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3172409