番茄是一種重要的果蔬類作物,是我國重要的經(jīng)濟作物之一,同時也是植物研究的重要模式植物。番茄的果實發(fā)育和種子形成是番茄生長發(fā)育過程中的重要環(huán)節(jié),也是影響番茄產(chǎn)量、質(zhì)量和經(jīng)濟價值的重要農(nóng)藝性狀。硫化氫（H₂S）是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種氣體信號分子,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)其在動植物中具有非常廣泛的生理功能。植物體中H₂S的生成主要是通過酶催化作用分解半胱氨酸產(chǎn)生的,而L-半胱氨酸硫醇裂解酶（LCD）便是這其中功能很重要的一種。在本研究中,我們克隆了番茄的LCD同源基因SlLCD,并通過生物化學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)和植物生理學(xué)的方法對該基因的功能進行了分析。研究結(jié)果如下:1.PCR擴增克隆得到番茄SlLCD基因編碼區(qū)序列。番茄SlLCD基因編碼區(qū)全長1365 bp,編碼蛋白長度為454 AA。SlLCD蛋白序列同擬南芥LCD序列的相似性為81%,但同番茄中其它硫化氫生成酶的序列相似性較低。SlLCD基因在不同的番茄組織器官中廣泛表達,尤其在心皮中表達量較高。2.構(gòu)建了番茄SlLCD基因的原核表達載體,并在體外成功獲得了SlLCD-His融合蛋白。酶活分析結(jié)果顯示SlL... 

【文章來源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 綜述
    1.1 番茄種子發(fā)育的研究進展
        1.1.1 番茄種子結(jié)構(gòu)及種子發(fā)育
        1.1.2 番茄果實發(fā)育過程中番茄種子發(fā)育的相關(guān)研究進展
        1.1.3 乙烯在種子生長和發(fā)育過程中的作用
        1.1.4 外源激素對番茄種子發(fā)育的作用
    1.2 植物中H_2S的生理功能研究進展
        1.2.1 H_2S的理化性質(zhì)
        1.2.2 生物體內(nèi)H_2S的產(chǎn)生
        1.2.3 H_2S在植物生長發(fā)育中的作用
        1.2.4 H_2S在植物抵御非生物脅迫中的功能
    1.3 外源H_2S處理對番茄生長發(fā)育的影響
    1.4 本課題的研究意義與目的
第二章 SlLCD的基因表達模式及序列分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 材料的獲得與培養(yǎng)
        2.1.2 所用到的藥品、試劑及儀器
        2.1.3 培養(yǎng)基的配制
        2.1.4 引物設(shè)計
    2.2 實驗方法
        2.2.1 提取番茄中的RNA并將其反轉(zhuǎn)錄
        2.2.2 番茄SlLCD基因的組織特異性表達分析
        2.2.3 qRT-PCR數(shù)據(jù)分析
        2.2.4 番茄SlLCD基因的克隆
        2.2.5 番茄SlLCD蛋白序列分析方法
    2.3 結(jié)果分析
        2.3.1 SlLCD基因的克隆
        2.3.2 SlLCD蛋白序列分析
        2.3.3 番茄SlLCD基因的組織特異性表達分析結(jié)果
    2.4 結(jié)論與討論
第三章 SlLCD酶活分析
    3.1 實驗材料
        3.1.1 載體和試劑
        3.1.2 培養(yǎng)基和相關(guān)溶液
    3.2 實驗方法
        3.2.1 SlLCD基因原核表達載體構(gòu)建
        3.2.2 蛋白膠的配制
        3.2.3 番茄SlLCD蛋白的純化
        3.2.4 番茄SlLCD基因的酶活分析
    3.3 結(jié)果分析
        3.3.1 番茄SlLCD蛋白原核表達載體的構(gòu)建
        3.3.2 番茄SlLCD蛋白的預(yù)誘導(dǎo)結(jié)果
        3.3.3 番茄SlLCD蛋白和擬南芥LCD蛋白的純化結(jié)果
        3.3.4 番茄SlLCD的酶活分析
    3.4 結(jié)論與討論
第四章 SlLCD基因的功能分析
    4.1 實驗材料
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 實驗所用到的試劑與儀器
        4.1.3 引物
    4.2 實驗方法
        4.2.1 試劑配制
        4.2.2 CRISPR載體構(gòu)建
        4.2.3 RNAi載體的構(gòu)建
        4.2.4 轉(zhuǎn)基因番茄植株的獲得
        4.2.5 陽性植株的鑒定
        4.2.6 外源H_2S體外生理實驗
    4.3 結(jié)果分析
        4.3.1 SlLCD-RNAi和 SlLCD-pKI1.1R載體構(gòu)建
        4.3.2 SlLCD-RNAi轉(zhuǎn)基因植株鑒定與表型分析
        4.3.3 基于CRISPR/Cas9 技術(shù)的SlLCD基因編輯轉(zhuǎn)基因植株鑒定與突變位點分析
    4.4 結(jié)論與討論
結(jié)論與展望
參考文獻
致謝
個人簡況及聯(lián)系方式


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]SEPALLATA類MADS盒基因SLMBP21參與番茄花柄離區(qū)發(fā)育的分子機制研究[D]. 劉旦梅.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013



本文編號：3171867