目的:構(gòu)建大鼠β-抑制蛋白2（β-arrestin2）基因過(guò)表達(dá)慢病毒載體并鑒定。方法:取Pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)中大鼠β-arrestin2的c DNA序列合成引物,采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增獲取大鼠β-arrestin2基因;采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定,回收PCR產(chǎn)物并對(duì)其進(jìn)行純化;取限制性內(nèi)切酶Bam HI/Age I酶切載體質(zhì)粒和純化后的PCR產(chǎn)物,將二者實(shí)施連接后轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞,挑取菌落進(jìn)行PCR鑒定,并對(duì)PCR鑒定陽(yáng)性的克隆進(jìn)行測(cè)序和比對(duì)抽提質(zhì)粒;將β-arrestin2重組質(zhì)粒與慢病毒輔助包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞,獲取病毒粗提液并進(jìn)行擴(kuò)增、純化,稀釋法測(cè)定病毒滴度、熒光顯微鏡下觀察慢病毒感染效率。結(jié)果:PCR擴(kuò)增所得產(chǎn)物大小為1 274 bp,與Pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)中該基因片段大小一致;陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子的PCR產(chǎn)物大小為728 bp,對(duì)比Pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)中大鼠Arrb2基因序列,上下游引物基因序列大小與轉(zhuǎn)化子PCR產(chǎn)物結(jié)果一致;慢病毒包裝完成后病毒滴度為5×1011TU/L,病毒感染效率較高。結(jié)論:成功構(gòu)建了攜帶大鼠β-arrestin2基因的慢病毒載體,目的基因在轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)能... 

【文章來(lái)源】：貴州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,45(09)

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 質(zhì)粒和病毒
        1.1.2 主要試劑和儀器
    1.2 方法
        1.2.1 目的基因片段的獲取
        1.2.2 建立、鑒定和重組質(zhì)粒法
        1.2.3 鑒定包裝慢病毒和感染效率
2 結(jié)果
    2.1 獲得和鑒定目的基因片段
    2.2 鑒定GV492-Arrb2重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化子
    2.3 病毒的滴度和感染效率
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子融合基因慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定[J]. 徐寵俊,林群.  慢性病學(xué)雜志. 2020(06)
[2]腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子過(guò)表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染脂肪干細(xì)胞的研究[J]. 應(yīng)誠(chéng)誠(chéng),王勇,李國(guó)灝,陳琳,郭永連.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2019 (05)
[3]基因修飾干/祖細(xì)胞在心肌梗死后心臟血管再生中的研究進(jìn)展[J]. 陶嘉萍,黃鋒,黃偉強(qiáng).  實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2018(24)
[4]偏向β-抑制蛋白的GPCR信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制及藥物研究進(jìn)展[J]. 殷琳,陳熙,楊秀穎,杜冠華.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2019(01)



本文編號(hào)：3171408