金魚草是一種在研究植物葉序方面十分特殊的植物,其同一植株上有著不同的葉序形態(tài),基部葉序以對生狀態(tài)為主,中上部葉序主要為螺旋狀互生。葉原基起源于植物頂端分生組織（SAM）,因其在莖尖上的發(fā)生位置不同,從而決定了葉在莖上的排列（葉序）。MADS-box基因家族是一類十分重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,對植物頂端分生組織（SAM）具有重要的影響。本研究以金魚草品種“泛美夏粉”為試驗材料,通過采用單酶切以及同源重組的方式構(gòu)建了過量表達(dá)載體,并經(jīng)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法成功將目的基因的過量表達(dá)載體轉(zhuǎn)入擬南芥中,獲得了多個株系,進行表型觀察,并輔以生物信息學(xué)分析,從而探究MADS-box基因AmDEFH28的基因功能及對植物葉序的影響。1.試驗根據(jù)課題組之前對金魚草葉序轉(zhuǎn)錄組的數(shù)據(jù)分析,通過Blast軟件搜索到目的基因AmDEFH28,設(shè)計引物,提取金魚草總RNA后,經(jīng)過RT-PCR方法克隆得到了目的基因AmDEFH28。并利用生物信息學(xué)對目的基因AmDEFH28進行分析,得到了全長759bp的CDS序列;目的基因AmDEFH28與PhFBP29相似度最高,相似度為85.77%;AmDEFH25基因所編碼的蛋白質(zhì)由252... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
縮寫和符號清單
第一章 文獻綜述
    1.1 金魚草
        1.1.1 金魚草概況
        1.1.2 金魚草研究進展
        1.1.3 金魚草葉序
    1.2 植物葉序
        1.2.1 葉序概況
        1.2.2 葉序的生長發(fā)育以及調(diào)控
        1.2.3 葉序的研究進展
    1.3 葉原基
        1.3.1 葉原基概況
        1.3.2 葉原基生長發(fā)育
    1.4 MADS-box基因簡介
        1.4.1 MADS-box基因概況
        1.4.2 MADS-box基因的分類、結(jié)構(gòu)與功能
        1.4.3 MADS-box基因的研究進展
第二章 引言
    2.1 研究內(nèi)容
    2.2 研究目的與意義
    2.3 技術(shù)路線
第三章 材料與方法
    3.1 試驗材料
        3.1.1 栽培植株
        3.1.2 栽培基質(zhì)
        3.1.3 試驗載體與試驗菌株
        3.1.4 試驗試劑與酶
        3.1.5 試驗所用儀器設(shè)備
        3.1.6 試驗引物合成以及基因測序
    3.2 試驗抗生素以及培養(yǎng)基
        3.2.1 試驗用抗生素
        3.2.2 試驗用培養(yǎng)基
    3.3 金魚草總RNA提取
        3.3.1 總RNA提取
        3.3.2 RNA純度和含量的檢測
    3.4 反轉(zhuǎn)錄
    3.5 AmDEFH28基因的克隆
        3.5.1 AmDEFH28基因克隆
        3.5.2 瓊脂糖凝膠電泳
        3.5.3 DNA凝膠回收
    3.6 AmDEFH28基因的時空表達(dá)
    3.7 AmDEFH28基因表達(dá)載體的構(gòu)建與轉(zhuǎn)化
        3.7.1 提取pCAMBIA1301質(zhì)粒
        3.7.2 單酶切與同源重組
        3.7.3 轉(zhuǎn)化大腸桿菌
        3.7.4 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
    3.8 轉(zhuǎn)基因擬南芥的獲得與鑒定
        3.8.1 花序浸染法轉(zhuǎn)化擬南芥
        3.8.2 擬南芥抗性苗的篩選
        3.8.3 擬南芥陽性苗的鑒定
    3.9 轉(zhuǎn)基因擬南芥的顯微觀察
第四章 結(jié)果與分析
    4.1 目的基因AmDEFH28基因的克隆
        4.1.1 目的基因AmDEFH28基因的來源
        4.1.2 金魚草幼芽總RNA的檢測
        4.1.3 目的基因AmDEFH28基因的克隆
    4.2 AmDEFH28基因的生物信息學(xué)分析
        4.2.1 AmDEFH28基因編碼的氨基酸序列的同源性分析
        4.2.2 AmDEFH28基因的進化樹分析
        4.2.3 AmDEFH28基因所編碼蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)分析
        4.2.4 AmDEFH28基因所編碼蛋白質(zhì)的保守結(jié)構(gòu)域分析
        4.2.5 AmDEFH28基因所編碼蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位預(yù)測
        4.2.6 AmDEFH28基因所編碼蛋白質(zhì)的蛋白信號肽分析
        4.2.7 AmDEFH28基因所編碼蛋白質(zhì)的磷酸化位點分析
        4.2.8 AmDEFH28基因所編碼蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        4.2.9 AmDEFH28基因所編碼蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)預(yù)測
    4.3 AmDEFH28基因在金魚草中的時空表達(dá)
    4.4 AmDEFH28基因的過量表達(dá)載體的構(gòu)建及驗證
    4.5 AmDEFH28基因的過量表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌及驗證
    4.6 AmDEFH28基因的轉(zhuǎn)基因擬南芥的獲得與鑒定
    4.7 AmDEFH28基因的轉(zhuǎn)基因擬南芥的熒光定量PCR驗證
    4.8 AmDEFH28基因的轉(zhuǎn)基因擬南芥的表型觀察
        4.8.1 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的整體長勢
        4.8.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的葉序
        4.8.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的葉片
        4.8.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的花與種莢
第五章 討論與結(jié)論
    5.1 討論
    5.2 結(jié)論
參考文獻
附錄 試驗所用軟件程序
作者簡介



本文編號：3171093