為研究高粱生長(zhǎng)調(diào)控因子（growth-regulating factor,GRF）在高粱生長(zhǎng)過(guò)程中的功能,采用生物信息學(xué)分析方法對(duì)高粱GRF基因家族進(jìn)行鑒定,并以高粱BTx623品種為材料,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得SbGRF4基因cDNA全長(zhǎng)序列,構(gòu)建pET-28a-SbGRF4重組質(zhì)粒,采用原核表達(dá)技術(shù)分別對(duì)表達(dá)菌株、誘導(dǎo)溫度以及異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG）誘導(dǎo)濃度進(jìn)行優(yōu)化,最后用Western blot技術(shù)對(duì)原核表達(dá)的SbGRF4蛋白進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果表明,在高粱中共鑒定到10個(gè)GRF基因SbGRF1～SbGRF10;亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)結(jié)果顯示均定位于細(xì)胞核中;分布于高粱的6條染色體上,所有家族成員均含有QLQ和WRC保守結(jié)構(gòu)域;系統(tǒng)進(jìn)化結(jié)果顯示,高粱GRF蛋白分為Class 2、Class 3、Class 4a、Class 4b四個(gè)亞家族;相同亞家族各個(gè)成員間外顯子和內(nèi)含子的數(shù)量差異較小;同一亞家族的高粱GRF蛋白保守基序具有相似性;克隆到的SbGRF4基因c DNA序列全長(zhǎng)為1 221 bp,并成功構(gòu)建p... 

【文章來(lái)源】：植物保護(hù)學(xué)報(bào). 2020,47(04)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 高粱GRF基因家族鑒定及生物信息學(xué)分析
        1.2.2 高粱GRF基因家族的系統(tǒng)進(jìn)化分析
        1.2.3 高粱SbGRF4基因的克隆及測(cè)序
        1.2.4 SbGRF4蛋白的可溶性表達(dá)條件篩選
        1.2.5 SbGRF4蛋白的Western blot檢測(cè)
2 結(jié)果與分析
    2.1 高粱GRF基因家族鑒定及其生物信息學(xué)分析
    2.2 高粱GRF基因家族系統(tǒng)進(jìn)化分析
    2.3 高粱SbGRF4基因的克隆
    2.4 高粱SbGRF4蛋白的原核表達(dá)條件
        2.4.1 SbGRF4表達(dá)菌株的篩選
        2.4.2 SbGRF4蛋白表達(dá)的誘導(dǎo)溫度篩選
        2.4.3 SbGRF4蛋白表達(dá)的誘導(dǎo)劑IPTG濃度篩選
    2.5 SbGRF4蛋白的Western blot檢測(cè)結(jié)果
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]龍眼GRF家族全基因組鑒定及表達(dá)模式[J]. 劉蒲東,張舒婷,陳曉慧,蘇立遙,姚德恒,李漢生,張梓浩,陳裕坤,林玉玲,賴(lài)鐘雄.  應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào). 2020(02)
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碩士論文
[1]利用原核系統(tǒng)表達(dá)富含二硫鍵蛋白質(zhì)的探索與改進(jìn)[D]. 劉開(kāi)泉.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3170406