蛋白質(zhì)的磷酸化是最常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一,多數(shù)蛋白質(zhì)的磷酸化發(fā)生在細胞內(nèi),由細胞內(nèi)蛋白激酶催化完成;細胞外蛋白質(zhì)酪蛋白的磷酸化也早在1883年就已發(fā)現(xiàn),但使其磷酸化的蛋白激酶卻直到130年后才被報道。此后VLK、c-Src酪氨酸激酶等多種分泌型蛋白激酶被陸續(xù)發(fā)現(xiàn)。我們研究發(fā)現(xiàn),c GMP依賴性蛋白激酶Ⅱ（TypeⅡc GMP-dependent protein kinase,PKGⅡ）也是一種分泌型蛋白激酶。早期研究證明,PKGⅡ可以通過阻斷血管內(nèi)皮細胞生長因子受體（Vascular Endothelial Growth Factor Receptor,VEGFR）等多種胃癌細胞受體酪氨酸激酶家族成員的激活來抑制由這些RTKs啟動的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和與之相關(guān)的胃癌細胞增殖、遷移等生物學(xué)活動,而分泌到細胞外的PKGⅡ?qū)毎淖饔眉白饔冒悬c尚不明確。本文以重組蛋白GST-PKGⅡ直接作用于胃癌細胞,模擬分泌型PKGⅡ的作用模式,在轉(zhuǎn)錄組測序分析的基礎(chǔ)上,結(jié)合實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR）和蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blotti... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫索引
第一章 緒論
    1.1 分泌型蛋白激酶的研究進展
        1.1.1 蛋白質(zhì)的磷酸化
        1.1.2 分泌型蛋白激酶及其研究進展
    1.2 PKGⅡ的研究背景
        1.2.1 PKG的種類及分布
        1.2.2 PKGⅡ的結(jié)構(gòu)
        1.2.3 PKGⅡ的活性調(diào)節(jié)機制
        1.2.4 PKGⅡ的主要生物學(xué)功能
        1.2.5 PKGⅡ與腫瘤的聯(lián)系
        1.2.6 關(guān)于PKGⅡ的新發(fā)現(xiàn)
    1.3 轉(zhuǎn)錄組測序分析技術(shù)及其應(yīng)用
        1.3.1 轉(zhuǎn)錄組測序分析技術(shù)的發(fā)展
            1.3.1.1 第一代測序技術(shù)
            1.3.1.2 第二代測序技術(shù)
            1.3.1.3 第三代測序技術(shù)
        1.3.2 轉(zhuǎn)錄組測序分析技術(shù)的優(yōu)勢
        1.3.3 轉(zhuǎn)錄組測序分析技術(shù)在胃腫瘤中的應(yīng)用
    1.4 本研究的目的和意義
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 研究意義
    1.5 本文的主要研究內(nèi)容和技術(shù)路線
        1.5.1 主要研究內(nèi)容
        1.5.2 技術(shù)路線
第二章 重組PKGⅡ?qū)ξ赴┘毎蛘{(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄組測序全面分析
    2.1 前言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 細胞株
        2.2.2 實驗材料和試劑
        2.2.3 主要實驗儀器
        2.2.4 主要試劑的配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 細胞培養(yǎng)
        2.3.2 總RNA的提取及質(zhì)量檢測
        2.3.3 轉(zhuǎn)錄組測序
            2.3.3.1 原始數(shù)據(jù)過濾
            2.3.3.2 數(shù)據(jù)拼接和組裝
        2.3.4 生物信息學(xué)分析
            2.3.4.1 Blast對比
            2.3.4.2 基因功能注釋及COG分類
            2.3.4.3 GO功能注釋
            2.3.4.4 差異表達基因的篩選
            2.3.4.5 差異表達基因的功能注釋
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 轉(zhuǎn)錄組測序原始數(shù)據(jù)統(tǒng)計及質(zhì)量評估
        2.4.2 All-Unigene基因功能注釋
            2.4.2.1 NR庫對比注釋
            2.4.2.2 All-Unigene COG功能分類
            2.4.2.3 All-Unigene GO功能分類
        2.4.3 差異表達基因的功能富集分析
            2.4.3.1 差異表達基因COG功能分類
            2.4.3.2 差異表達基因GO功能分類
            2.4.3.3 GST-PKGⅡ?qū)ξ赴〢GS基因表達影響的初步分析
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
第三章 GST-PKGⅡ作用下差異表達基因的轉(zhuǎn)錄組測序篩選
    3.1 前言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 細胞株
        3.2.2 實驗材料和試劑
        3.2.3 主要實驗儀器
        3.2.4 主要試劑的配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細胞培養(yǎng)
        3.3.2 差異表達基因的實時熒光定量PCR驗證
        3.3.3 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.4 結(jié)果與分析
    3.5 討論
    3.6 本章小結(jié)
第四章 重組PKGⅡ?qū)ξ赴┘毎蠩GF表達的影響
    4.1 前言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 細胞株
        4.2.2 實驗材料和試劑
        4.2.3 主要實驗儀器
        4.2.4 主要試劑的配制
    4.3 實驗方法
        4.3.1 細胞培養(yǎng)
        4.3.2 胃癌細胞總蛋白和核、漿蛋白的抽提及Western blotting
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 重組PKGⅡ抑制胃癌細胞EGF表達
        4.4.2 生長因子EGF和 VEGF-A促進胃癌細胞EGF表達
        4.4.3 重組PKGⅡ抑制VEGF-A介導(dǎo)的胃癌細胞ERK1/2 磷酸化
        4.4.4 重組PKGⅡ抑制胃癌細胞HIF-1α核轉(zhuǎn)位
    4.5 討論
    4.6 本章小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 本論文的主要結(jié)論
    5.2 研究展望
參考文獻
致謝
攻讀碩士期間已發(fā)表文章



本文編號：3168433