發(fā)布時間：2021-04-29 13:04

　　丙酮酸脫氫酶磷酸酶GhPDP與棉花雄性不育能量調(diào)控方面密切相關(guān)。為了得到大量有活性的GhPDP蛋白,試驗將對目的蛋白原核表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化。將編碼GhPDP基因的cDNA序列插入pET-22b中構(gòu)建重組表達(dá)載體pET-22b-GhPDP,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌Transetta（DE3）進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá),通過單因素試驗和正交試驗對誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)時間、IPTG終濃度和OD₆₀₀進(jìn)行優(yōu)化,利用SDS-PAGE和GeneTools凝膠分析軟件分析目的蛋白的表達(dá)量,以摸索目的蛋白可溶性表達(dá)的最佳條件。結(jié)果顯示,成功構(gòu)建重組表達(dá)載體pET-22b-GhPDP;目的蛋白在Transetta（DE3）菌株中表達(dá),表達(dá)形式多為包涵體;單因素試驗結(jié)果表明,在誘導(dǎo)溫度20℃、誘導(dǎo)時間為5 h、IPTG終濃度0.10 mmol/L和菌體密度OD₆₀₀ 為0.8條件下,目的蛋白可溶性表達(dá)量最高;通過正交分析得出,影響目的蛋白可溶性表達(dá)的因素強度由高到低依次為誘導(dǎo)溫度、IPTG終濃度、誘導(dǎo)時間及菌體密度OD₆₀₀。綜合單因素試驗和正交試驗結(jié)果,確定誘導(dǎo)... 

【文章來源】：華北農(nóng)學(xué)報. 2020,35(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 試驗材料
        1.1.1 菌株與質(zhì)粒
        1.1.2 主要試劑
    1.2 試驗方法
        1.2.1 重組表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
        1.2.2 GhPDP蛋白表達(dá)條件的優(yōu)化
            1.2.2.1 誘導(dǎo)溫度
            1.2.2.2 誘導(dǎo)時間
            1.2.2.3 IPTG終濃度
            1.2.2.4 菌體密度OD600
            1.2.2.5 正交試驗設(shè)計
            1.2.2.6 正交試驗數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 重組表達(dá)載體的鑒定
    2.2 目的蛋白表達(dá)形式的確定
    2.3 重組蛋白表達(dá)條件優(yōu)化
        2.3.1 不同誘導(dǎo)溫度對目的蛋白表達(dá)量的影響
        2.3.2 不同誘導(dǎo)時間對目的蛋白表達(dá)量的影響
        2.3.3 不同IPTG終濃度對目的蛋白表達(dá)量的影響
        2.3.4 不同菌體密度OD600對目的蛋白表達(dá)量的影響
        2.3.5 GhPDP蛋白誘導(dǎo)優(yōu)化條件正交試驗
        2.3.6 正交試驗數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)論與討論
    3.1 GhPDP原核表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)
    3.2 誘導(dǎo)溫度對目的蛋白表達(dá)量的影響
    3.3 IPTG濃度對目的蛋白表達(dá)量的影響
    3.4 誘導(dǎo)時間對目的蛋白表達(dá)量的影響
    3.5 菌體密度OD600對目的蛋白表達(dá)量的影響
    3.6 原核表達(dá)的最佳誘導(dǎo)條件


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[10]重組人血管內(nèi)皮抑制素（rh-Endostatin）大腸桿菌表達(dá)體系發(fā)酵條件的優(yōu)化[J]. 常國棟,李壯林,秦加陽,馬翠卿,羅永章,許平.  生物工程學(xué)報. 2005(04)

碩士論文
[1]棉花GhPDC-E1α克隆及調(diào)控基因表達(dá)模式研究[D]. 康娜娜.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018



本文編號：3167581