目的:建立Hras12V轉(zhuǎn)基因雌鼠肝腫瘤組織來源的永生化巨噬細(xì)胞系,為探究腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響提供良好的實(shí)驗(yàn)工具。方法:1.選用Hras12V轉(zhuǎn)基因雌鼠1只,在無菌的條件下,正常解剖采集肝腫瘤組織,用組織塊培養(yǎng)法獲得細(xì)胞克隆團(tuán),后經(jīng)過60次連續(xù)傳代培養(yǎng),成功建立巨噬細(xì)胞系,命名為FMHRL10。2.PCR法檢測基因組DNA,鑒定FMHRL10的來源;蛋白質(zhì)印跡法檢測FMHRL10的信號分子表達(dá)和活化水平與來源小鼠的肝癌組織的差異。3.采用Cell Counting Kit-8染色,利用酶標(biāo)儀檢測細(xì)胞生長值,繪制細(xì)胞生長曲線圖。4.采用細(xì)胞周期和凋亡試劑盒,檢測FMHRL10的細(xì)胞周期和凋亡情況。5.姬姆薩染色法進(jìn)行FMHRL10的形態(tài)學(xué)分析。6.流式細(xì)胞術(shù)檢測FMHRL10的細(xì)胞類型。7.采用吞噬作用測定試劑盒（Phagocytosis Assay Kit）檢測FMHRL10的吞噬能力。8.用Western blot和RT-q PCR的方法,比較FMHRL10與小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞RAW264.7的異同。9.用裸鼠檢測FMHRL10的體內(nèi)成瘤性。10.用細(xì)胞凋亡試... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料和方法
    1.材料
    2.方法
結(jié)果
    1.FMHRL10 肝腫瘤來源巨噬細(xì)胞系的初步建立
    2.FMHRL10 細(xì)胞系的基因型鑒定
    3.FMHRL10 細(xì)胞信號通路活化水平的檢測
    4.FMHRL10 細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞生物學(xué)分析
    5.FMHRL10 細(xì)胞的巨噬細(xì)胞特性檢測
    6.FMHRL10 細(xì)胞的吞噬能力檢測
    7.FMHRL10和RAW264.7 信號通路活性及基因表達(dá)的比較
    8.FMHRL10 細(xì)胞的裸鼠體內(nèi)成瘤性檢測
    9.FMHRL10 分泌物對腫瘤細(xì)胞的影響
    10.FMHRL10 細(xì)胞對體內(nèi)肝腫瘤細(xì)胞成瘤性的影響
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]實(shí)驗(yàn)動(dòng)物從業(yè)人員培訓(xùn)系統(tǒng)的建立與應(yīng)用[J]. 林凱麗,劉梅軒,孫井江,潘思丹,高虹.  中國比較醫(yī)學(xué)雜志. 2018(05)
[2]改良酚-氯仿法提取及不同試劑盒擴(kuò)增檢測陳舊性人骨DNA[J]. 張玥,徐國昌,徐凱,王友政,任甫,李紅衛(wèi).  重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(08)



本文編號：3154168