目的:建立Hras12V轉(zhuǎn)基因雌鼠肝腫瘤組織來源的永生化巨噬細胞系,為探究腫瘤相關(guān)巨噬細胞對腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響提供良好的實驗工具。方法:1.選用Hras12V轉(zhuǎn)基因雌鼠1只,在無菌的條件下,正常解剖采集肝腫瘤組織,用組織塊培養(yǎng)法獲得細胞克隆團,后經(jīng)過60次連續(xù)傳代培養(yǎng),成功建立巨噬細胞系,命名為FMHRL10。2.PCR法檢測基因組DNA,鑒定FMHRL10的來源;蛋白質(zhì)印跡法檢測FMHRL10的信號分子表達和活化水平與來源小鼠的肝癌組織的差異。3.采用Cell Counting Kit-8染色,利用酶標儀檢測細胞生長值,繪制細胞生長曲線圖。4.采用細胞周期和凋亡試劑盒,檢測FMHRL10的細胞周期和凋亡情況。5.姬姆薩染色法進行FMHRL10的形態(tài)學分析。6.流式細胞術(shù)檢測FMHRL10的細胞類型。7.采用吞噬作用測定試劑盒（Phagocytosis Assay Kit）檢測FMHRL10的吞噬能力。8.用Western blot和RT-q PCR的方法,比較FMHRL10與小鼠單核巨噬細胞白血病細胞RAW264.7的異同。9.用裸鼠檢測FMHRL10的體內(nèi)成瘤性。10.用細胞凋亡試... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料和方法
    1.材料
    2.方法
結(jié)果
    1.FMHRL10 肝腫瘤來源巨噬細胞系的初步建立
    2.FMHRL10 細胞系的基因型鑒定
    3.FMHRL10 細胞信號通路活化水平的檢測
    4.FMHRL10 細胞相關(guān)的細胞生物學分析
    5.FMHRL10 細胞的巨噬細胞特性檢測
    6.FMHRL10 細胞的吞噬能力檢測
    7.FMHRL10和RAW264.7 信號通路活性及基因表達的比較
    8.FMHRL10 細胞的裸鼠體內(nèi)成瘤性檢測
    9.FMHRL10 分泌物對腫瘤細胞的影響
    10.FMHRL10 細胞對體內(nèi)肝腫瘤細胞成瘤性的影響
討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]實驗動物從業(yè)人員培訓系統(tǒng)的建立與應用[J]. 林凱麗,劉梅軒,孫井江,潘思丹,高虹.  中國比較醫(yī)學雜志. 2018(05)
[2]改良酚-氯仿法提取及不同試劑盒擴增檢測陳舊性人骨DNA[J]. 張玥,徐國昌,徐凱,王友政,任甫,李紅衛(wèi).  重慶醫(yī)科大學學報. 2015(08)



本文編號：3154168