長白落葉松（Larix olgensis）是我國東北地區(qū)主要造林樹種,具有生長快、生態(tài)效益好、工藝價值高的特點(diǎn),被廣泛用于荒山造林和紙漿林等的營建。常規(guī)育種周期較長,通過轉(zhuǎn)基因手段可快速獲得優(yōu)良植株,以滿足市場的需求。轉(zhuǎn)錄因子在轉(zhuǎn)錄水平對基因時空表達(dá)的調(diào)控,影響著植物的生長發(fā)育及抵抗逆境的能力。MYB和NAC作為植物中較大的轉(zhuǎn)錄因子家族,主要參與包括初生和次生代謝反應(yīng)、植物生長發(fā)育、細(xì)胞形態(tài)與模式建成、響應(yīng)生物和非生物脅迫等生物學(xué)過程。本文以長白落葉松為試驗材料,通過瞬時遺傳轉(zhuǎn)化對基因抗旱性進(jìn)行研究,主要結(jié)論如下:1.從長白落葉松中克隆得到全長為1121bp、1223bp和1042bp的LoMYB8、LoMYB9、LoNAC18,構(gòu)建過表達(dá)及抑制表達(dá)載體及工程菌株。2.構(gòu)建長白落葉松瞬時遺傳轉(zhuǎn)化體系,運(yùn)用GUS染色及LoMYB8、LoMYB9、LoNAC18的基因表達(dá)量分析,驗證體系構(gòu)建成功。3.在PEG模擬干旱脅迫條件下,LoMYB8基因被干旱誘導(dǎo),基因表達(dá)量較對照有明顯上調(diào),生理指標(biāo)結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因植株的抗旱性提高,說明該基因參與了長白落葉松對干旱脅迫的應(yīng)答,而LoMYB9、LoNA... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 林木遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展
        1.1.1 遺傳轉(zhuǎn)化的方法
        1.1.2 轉(zhuǎn)化植株的鑒定
    1.2 MYB和NAC轉(zhuǎn)錄因子家族研究進(jìn)展
    1.3 干旱脅迫下基因表達(dá)及代謝產(chǎn)物的研究進(jìn)展
        1.3.1 林木抗旱基因
        1.3.2 干旱脅迫下林木代謝物質(zhì)的變化
    1.4 目的與意義
    1.5 技術(shù)路線
2 長白落葉松瞬時遺傳轉(zhuǎn)化體系建立
    2.1 材料與方法
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株與載體材料
    2.2 試劑與藥品配制
        2.2.1 試劑
        2.2.2 藥品配制
    2.3 主要儀器設(shè)備
    2.4 試驗方法
        2.4.1 RNA提取
        2.4.2 cDNA合成
        2.4.3 基因克隆
        2.4.4 植物過表達(dá)載體構(gòu)建
        2.4.5 植物抑制表達(dá)載體構(gòu)建
        2.4.6 長白落葉松瞬時遺傳轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建
        2.4.7 數(shù)據(jù)處理與分析
    2.5 結(jié)果與分析
        2.5.1 基因克隆
        2.5.2 載體構(gòu)建
        2.5.3 長白落葉松瞬時遺傳轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建
        2.5.4 小結(jié)
3 長白落葉松瞬時遺傳轉(zhuǎn)化植株抗旱性分析
    3.1 試驗材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株與載體材料
    3.2 試劑與藥品配置
        3.2.1 試劑
        3.2.2 藥品配置
    3.3 主要儀器設(shè)備
    3.4 試驗方法
        3.4.1 PEG模擬干旱脅迫
        3.4.2 瞬時遺傳轉(zhuǎn)化植株基因表達(dá)量測定
        3.4.3 PEG脅迫轉(zhuǎn)基因植株生理生化指標(biāo)分析
        3.4.4 數(shù)據(jù)處理與分析
    3.5 結(jié)果與分析
        3.5.1 PEG脅迫下植株的基因表達(dá)量分析
        3.5.2 PEG脅迫下植株的生理生化指標(biāo)分析
        3.5.3 小結(jié)
4 PEG脅迫轉(zhuǎn)基因長白落葉松轉(zhuǎn)錄組及代謝組分析
    4.1 試驗材料及藥品配置
    4.2 試驗方法
        4.2.1 PEG脅迫轉(zhuǎn)基因長白落葉松轉(zhuǎn)錄組測序
        4.2.2 轉(zhuǎn)基因長白落葉松代謝組測序
        4.2.3 數(shù)據(jù)處理與分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 PEG脅迫轉(zhuǎn)基因長白落葉松轉(zhuǎn)錄組分析
        4.3.2 PEG脅迫轉(zhuǎn)基因長白落葉松代謝組分析
        4.3.3 小結(jié)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]抗CMV轉(zhuǎn)基因辣椒實(shí)時熒光PCR檢測方法研究[J]. 羅阿東,王麗平,任艷玲,蔡秋,王艷.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2019(05)
[2]板栗非胚性愈傷組織DsRed基因瞬時轉(zhuǎn)化方法建立和優(yōu)化[J]. 李志,邢宇,房克鳳,曹慶芹,秦嶺,張卿.  北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報. 2019(03)
[3]干旱脅迫下長白落葉松的代謝組學(xué)分析[J]. 熊歡歡,張含國,張磊,閆閃閃.  東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2019(04)
[4]干旱脅迫下外源硒對小麥幼苗抗旱性的影響[J]. 蘭敏,尹美強(qiáng),蘆文杰,溫銀元,孫敏,高志強(qiáng),郝興宇.  土壤. 2018(06)
[5]干旱脅迫對2個甘蔗品種生長和生理生化特性的影響[J]. 李健,農(nóng)艷豐.  安徽農(nóng)學(xué)通報. 2018(21)
[6]基于轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)分析及高通量GO注釋理論的研究[J]. 劉粉香,楊文國,孫勤紅.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(31)
[7]干旱脅迫對油松生理指標(biāo)的影響[J]. 任貴軍.  遼寧林業(yè)科技. 2018(05)
[8]不同家系馬尾松苗木對持續(xù)干旱的響應(yīng)[J]. 莫榮海,丁貴杰,羅仙英,陳龍.  森林與環(huán)境學(xué)報. 2018(04)
[9]基于馬尾松干旱轉(zhuǎn)錄組的抗旱功能SSR位點(diǎn)分析[J]. 杜明鳳,丁貴杰.  林業(yè)科學(xué)研究. 2018(05)
[10]PCR技術(shù)在植物生物學(xué)研究中的應(yīng)用[J]. 李冬潔.  種子科技. 2018(08)

博士論文
[1]敖漢苜蓿小花與種子響應(yīng)硼脅迫的蛋白質(zhì)組學(xué)與代謝組學(xué)分析[D]. 陳玲玲.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]高溫和干旱脅迫下茶樹轉(zhuǎn)錄組分析及Histone H1基因的功能鑒定[D]. 王偉東.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]胡楊干旱響應(yīng)轉(zhuǎn)錄組及NF-YB基因表達(dá)譜[D]. 嚴(yán)東輝.北京林業(yè)大學(xué) 2013
[4]干旱脅迫下長白落葉松家系變異的研究[D]. 張磊.東北林業(yè)大學(xué) 2012
[5]細(xì)枝木麻黃再生體系及農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化研究[D]. 姜清彬.中國林業(yè)科學(xué)研究院 2011

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[1]香榧體胚發(fā)生體系的優(yōu)化及遺傳體系的構(gòu)建[D]. 龔麗.浙江農(nóng)林大學(xué) 2018
[2]土施四種B族維生素對‘富士’蘋果葉片營養(yǎng)及果實(shí)品質(zhì)的影響[D]. 于文章.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[3]長白落葉松體細(xì)胞胚胎發(fā)生及遺傳轉(zhuǎn)化研究[D]. 宋躍.東北林業(yè)大學(xué) 2017
[4]基于高通量測序的木麻黃轉(zhuǎn)錄組分析[D]. 劉海.福建農(nóng)林大學(xué) 2014
[5]木薯干旱脅迫相關(guān)R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子MeMYB63的基因特性及啟動子分析[D]. 榮晶.海南大學(xué) 2014
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[7]NtNAC-R1介導(dǎo)煙株打頂誘導(dǎo)煙堿生物合成過程[D]. 程廣偉.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
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[9]農(nóng)桿菌介導(dǎo)巨桉無性系Eg5遺傳轉(zhuǎn)化的研究[D]. 郭利軍.中國林業(yè)科學(xué)研究院 2012
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本文編號：3151574