運(yùn)用四重實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（polymerase chain reaction,PCR）對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米及其深加工制品進(jìn)行篩選檢測(cè)。選定花椰菜花葉病毒35S啟動(dòng)子（pCaMV35S）、農(nóng)桿菌的胭脂堿合成酶基因終止子（tNOS）以及根癌農(nóng)桿菌CP4蛋白基因和5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因（EPSPS）為外源基因,選定編碼玉米淀粉合成酶異構(gòu)體zSTSII-2 （zSSIIb）基因作為玉米物種的內(nèi)參照基因。設(shè)計(jì)和合成靶標(biāo)基因特異性引物和多重?zé)晒馓结?經(jīng)特異性、重復(fù)性、靈敏性和適用性等方法學(xué)驗(yàn)證建立了四重實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法。結(jié)果表明該方法檢測(cè)特異性強(qiáng),重復(fù)性好,擴(kuò)增效率在90%～110%,標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R²≥0.99,最低檢測(cè)限為每20μL反應(yīng)13個(gè)拷貝,最低定量限為每20μL反應(yīng)1.3個(gè)拷貝,其檢測(cè)結(jié)果與SN/T 1204—2016標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)結(jié)果一致,由于四個(gè)目標(biāo)基因可以在一個(gè)反應(yīng)管中進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng),且含有內(nèi)源基因和外源基因,可降低試劑成本,簡化操作程序,縮短檢測(cè)時(shí)間,為玉米及其深加工產(chǎn)品轉(zhuǎn)基因成分的快速檢測(cè)提供參考。 

【文章來源】：中國糧油學(xué)報(bào). 2020,35(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

外源基因pCaMV35S、tNOS和EPSPS以及內(nèi)源

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3147010