發(fā)布時間：2021-04-18 08:45

　　目的:建立一種干擾素誘導跨膜蛋白2（IFITM2）基因SYBR Green I實時熒光定量PCR檢測方法,以期為IFITM2基因的動態(tài)監(jiān)測提供有效的檢測技術(shù).方法:根據(jù)GenBank中公布的IFITM2基因序列設(shè)計特異性引物,以質(zhì)粒pMD18-T-IFITM2為模板進行條件優(yōu)化,繪制標準曲線,建立IFITM2基因SYBR Green I實時熒光定量PCR檢測方法,并對建立的方法進行條件優(yōu)化與評價,用建立的方法對腦心肌炎病毒感染后細胞中IFITM2基因轉(zhuǎn)錄水平進行檢測.結(jié)果:建立的20μL檢測體系中IFITM2基因最佳引物濃度為10μM,最佳退火溫度為59℃;標準質(zhì)粒在2.62×10⁵～2.62×10¹⁰copies/μL濃度范圍內(nèi)與Ct值呈良好線性關(guān)系,線性方程y=-3.495 logx+43.12,R²=0.998,且靈敏性、特異性和重復性均較高.應(yīng)用建立的方法對EMCV感染細胞中IFITM2基因轉(zhuǎn)錄水平進行檢測,結(jié)果顯示,在感染早期IFITM2轉(zhuǎn)錄水平不變,感染后期轉(zhuǎn)錄水平逐漸升高.EMCV感染引起宿主IFITM2基... 

【文章來源】：西北民族大學學報(自然科學版). 2020,41(03)

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

IFITM2基因PCR擴增（A）及重組質(zhì)粒的酶切鑒定（B)

通過引物濃度、退火溫度優(yōu)化得出建立的qPCR方法是反應(yīng)體系20 μL:SYBR? Select Master Mix 10.0 μL,ddH2O 6 μL,IFITM2 qF/R(10 μmol/L)各1.0 μL,模板 2.0 μL.反應(yīng)條件:95 ℃ 30 s,95 ℃ 5 s,59 ℃ 34 s,40次循環(huán).根據(jù)擴增標準曲線得出人源IFITM2基因 SYBR Green I實時熒光定量PCR 檢測的最佳引物濃度為10 μmol/L(圖2),最佳退火溫度為59 ℃(圖3).圖3 反應(yīng)溫度優(yōu)化

反應(yīng)溫度優(yōu)化

【參考文獻】：
期刊論文
[1]CD63基因TaqMan實時熒光定量PCR檢測方法的建立及評價[J]. 包曉婧,張海霞,李瓊毅,馬玉梅,令瑛,魏嘉,李向茸,徐雷,馮若飛,馬忠仁.  中國獸醫(yī)科學. 2016(09)
[2]干擾素誘導的跨膜蛋白抗病毒作用的研究進展[J]. 陳永坤,朱聞斐,舒躍龍.  病毒學報. 2016(02)
[3]雞IFITM3基因的序列分析和組織表達特征[J]. 郝方元,董萬強,劉俊,任乾,張馳宇.  江蘇大學學報(醫(yī)學版). 2011(02)

碩士論文
[1]SFTSV感染對宿主固有免疫關(guān)鍵分子表達調(diào)節(jié)及IFITM3對其抑制作用[D]. 趙飛.中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院 2017
[2]天然免疫相關(guān)因子對SFTS病毒感染的作用研究[D]. 萬佳.中國疾病預防控制中心 2016



本文編號：3145187