研究背景:CRISPR/Cas9技術(shù)具有實(shí)驗(yàn)周期短和編輯效率高的優(yōu)勢(shì),已廣泛運(yùn)用到基因編輯和基因敲除小鼠模型的構(gòu)建中。但是,由于致死基因缺失會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物死亡,利用一般的CRISPR/Cas9技術(shù)通常造成致死基因全身性敲除的首建鼠（F₀代）無(wú)法出生或性成熟前死亡。研究方法:本研究開(kāi)發(fā)了一種可傳代繁育的致死基因全身性敲除小鼠模型的制備方法。（1）利用生物信息學(xué)系統(tǒng)設(shè)計(jì)構(gòu)建致死基因CRISPR/Cas9系統(tǒng)元件;（2）將受精卵體外培養(yǎng)發(fā)育至二細(xì)胞期進(jìn)行顯微注射;（3）將注射后的二細(xì)胞進(jìn)行胚胎移植,獲得嵌合體首建鼠;（4）首建鼠實(shí)現(xiàn)傳代繁育。對(duì)嵌合體首建鼠和后代鼠進(jìn)行基因測(cè)序,均發(fā)現(xiàn)了敲除移碼突變,成功的建立了致死基因全身性敲除小鼠模型系。結(jié)論:本研究綜合運(yùn)用分子克隆、顯微操作、胚胎移植、分子測(cè)序、CRISPR/Cas9等技術(shù)方法,證實(shí)了利用CRIPR/Cas9技術(shù),在胚胎的二細(xì)胞期進(jìn)行顯微注射的方法可以用于致死基因全身性敲出動(dòng)物模型的構(gòu)建。 

【文章來(lái)源】：北京農(nóng)學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：35 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖3-2兩種致死基因的編輯位點(diǎn)示意圖

二細(xì)胞期CRISPR-Cas9制備基因敲除小鼠流程

Slc17a5首建鼠及F1鼠Sanger測(cè)序結(jié)果


本文編號(hào)：3141332