研究背景:CRISPR/Cas9技術具有實驗周期短和編輯效率高的優(yōu)勢,已廣泛運用到基因編輯和基因敲除小鼠模型的構建中。但是,由于致死基因缺失會導致動物死亡,利用一般的CRISPR/Cas9技術通常造成致死基因全身性敲除的首建鼠（F₀代）無法出生或性成熟前死亡。研究方法:本研究開發(fā)了一種可傳代繁育的致死基因全身性敲除小鼠模型的制備方法。（1）利用生物信息學系統(tǒng)設計構建致死基因CRISPR/Cas9系統(tǒng)元件;（2）將受精卵體外培養(yǎng)發(fā)育至二細胞期進行顯微注射;（3）將注射后的二細胞進行胚胎移植,獲得嵌合體首建鼠;（4）首建鼠實現傳代繁育。對嵌合體首建鼠和后代鼠進行基因測序,均發(fā)現了敲除移碼突變,成功的建立了致死基因全身性敲除小鼠模型系。結論:本研究綜合運用分子克隆、顯微操作、胚胎移植、分子測序、CRISPR/Cas9等技術方法,證實了利用CRIPR/Cas9技術,在胚胎的二細胞期進行顯微注射的方法可以用于致死基因全身性敲出動物模型的構建。 

【文章來源】：北京農學院北京市

【文章頁數】：35 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖3-2兩種致死基因的編輯位點示意圖

二細胞期CRISPR-Cas9制備基因敲除小鼠流程

Slc17a5首建鼠及F1鼠Sanger測序結果


本文編號：3141332