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基于CRISPR/Cas9技術(shù)的和1基因敲除MDCK細(xì)胞系的構(gòu)建及初步鑒定

發(fā)布時(shí)間:2021-04-15 23:27
  目的 構(gòu)建線粒體抗病毒信號(hào)(mitochondrial antiviral signaling,MAVS)和核因子κB1(nuclear factorkappa B1,NFκB1)基因敲除的犬腎細(xì)胞系(Madin-Daby canine kidney cells, MDCK),對(duì)細(xì)胞系的生長(zhǎng)特性、流感病毒(influenza virus, Flu)的增殖特性進(jìn)行初步鑒定。方法 采用CRISPR/Cas9技術(shù),將MDCK細(xì)胞的MAVS和NFκB1基因敲除,獲得穩(wěn)定的敲除細(xì)胞系。接種Flu并檢測(cè)培養(yǎng)上清中病毒的血凝(hemagglutinination, HA)滴度和TCID50滴度,與野生MDCK細(xì)胞進(jìn)行比較。結(jié)果 獲得2株穩(wěn)定敲除的MDCK細(xì)胞系MDCK-MAVS-和MDCK-NFκB1-,與野生MDCK細(xì)胞同樣為貼壁的上皮樣細(xì)胞。接種Flu后,2株敲除細(xì)胞系測(cè)定的病毒HA滴度與野生細(xì)胞相比無(wú)明顯差異,TCID50分別比野生MDCK細(xì)胞系提高了9.5倍和10倍,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0316)。結(jié)論 本研究構(gòu)建的2株基因敲除細(xì)胞系MDCK-MAVS-和MDCK-NFκB1-能夠提... 

【文章來(lái)源】:中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志. 2020,(02)

【文章頁(yè)數(shù)】: 頁(yè)


本文編號(hào):3140292

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