第一部分:DFNA5表達分布及亞細胞定位的研究目的:通過新生大鼠全身多個器官DFNA5表達量檢測、大鼠耳蝸冰凍切片和HEI-OC1細胞免疫熒光染色,研究DFNA5在大鼠體內(nèi)的表達分布及亞細胞定位。方法:取新生1天SD大鼠的肝、肺、腎、脾、心臟、肌肉、腦和耳蝸等組織器官,提取總蛋白質(zhì),通過蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot）檢測DFNA5在各組織器官中的表達水平;取新生1天SD大鼠耳蝸進行冰凍切片,免疫熒光染色觀察DFNA5在耳蝸內(nèi)的表達分布;免疫熒光染色觀察DFNA5在HEI-OC1細胞中的亞細胞定位。結(jié)果:大鼠耳蝸、肌肉、腦、脾、心臟、腎、肺和肝等組織器官中均表達DFNA5,其中耳蝸表達量最高;冰凍切片結(jié)果顯示DFNA5在大鼠耳蝸中內(nèi)源性表達于毛細胞和螺旋神經(jīng)節(jié)細胞中;傳代培養(yǎng)的HEI-OC1細胞內(nèi)源性表達的DFNA5均勻分布于胞質(zhì)中。結(jié)論:大鼠多個組織器官內(nèi)源性表達DFNA5,耳蝸中表達水平最高,耳蝸內(nèi)DFNA5主要表達于毛細胞和螺旋神經(jīng)節(jié)細胞中,HEI-OC1細胞內(nèi)源性表達的DFNA5主要分布于胞質(zhì)。第二部分:不同DFNA5片段對哺乳動物細胞毒性作用的研究目的:通過將不同D... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

野生型和突變型DFNA5及其所表達蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)示意圖

空軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文-25-聚焦顯微鏡觀察并拍照。3結(jié)果3.1DFNA5在大鼠各器官中的表達WesternBlot結(jié)果顯示大鼠耳蝸、肌肉、腦、脾、心臟、腎、肺和肝等組織器官中均有不同程度DFNA5表達，其中耳蝸表達量最高，在脾、心臟、肺中也有較高水平表達（圖2）。圖2DFNA5在大鼠各組織器官中的表達水平左圖：WesternBlot檢測DFNA5在各組織器官內(nèi)的表達情況；右圖：以GAPDH內(nèi)參標(biāo)準(zhǔn)化的DFNA5表達量。3.2DFNA5在大鼠耳蝸內(nèi)表達分布冰凍切片anti-DFNA5染色顯示大鼠耳蝸中內(nèi)源性表達DFNA5，利用anti-Parvalbumin特異性標(biāo)記毛細胞和螺旋神經(jīng)元細胞胞漿，發(fā)現(xiàn)DFNA5在大鼠耳蝸內(nèi)主要表達于毛細胞和螺旋神經(jīng)節(jié)細胞中（圖3）。圖3新生SD大鼠耳蝸冰凍切片免疫熒光染色（600×）上圖：毛細胞（HCs）；下圖：螺旋神經(jīng)節(jié)（SGNs）。

空軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文-25-聚焦顯微鏡觀察并拍照。3結(jié)果3.1DFNA5在大鼠各器官中的表達WesternBlot結(jié)果顯示大鼠耳蝸、肌肉、腦、脾、心臟、腎、肺和肝等組織器官中均有不同程度DFNA5表達，其中耳蝸表達量最高，在脾、心臟、肺中也有較高水平表達（圖2）。圖2DFNA5在大鼠各組織器官中的表達水平左圖：WesternBlot檢測DFNA5在各組織器官內(nèi)的表達情況；右圖：以GAPDH內(nèi)參標(biāo)準(zhǔn)化的DFNA5表達量。3.2DFNA5在大鼠耳蝸內(nèi)表達分布冰凍切片anti-DFNA5染色顯示大鼠耳蝸中內(nèi)源性表達DFNA5，利用anti-Parvalbumin特異性標(biāo)記毛細胞和螺旋神經(jīng)元細胞胞漿，發(fā)現(xiàn)DFNA5在大鼠耳蝸內(nèi)主要表達于毛細胞和螺旋神經(jīng)節(jié)細胞中（圖3）。圖3新生SD大鼠耳蝸冰凍切片免疫熒光染色（600×）上圖：毛細胞（HCs）；下圖：螺旋神經(jīng)節(jié)（SGNs）。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]小鼠內(nèi)耳圓窗基因?qū)氲膶嶒炑芯縖J]. 朱光潔,徐琳,高下,陳杰,丁小瓊,麻曉峰,陸玲,秦小明,周函,崔昕燕.  聽力學(xué)及言語疾病雜志. 2010(04)
[2]耳后入路圓窗膜顯微注射小鼠耳蝸基因轉(zhuǎn)染新途徑的研究[J]. 徐延軍,胡吟燕,翟所強,孫建和,徐金操,候昭暉,申衛(wèi)東,于寧,楊仕明,韓東一.  聽力學(xué)及言語疾病雜志. 2009(03)
[3]細胞焦亡:一種新的細胞死亡方式[J]. 林靜,李大主.  國際免疫學(xué)雜志. 2011 (03)



本文編號：3138047