發(fā)布時(shí)間：2021-04-13 13:43

　　目的研究EB病毒（Eepstein-Barr virus,EBV）潛伏期膜蛋白1（latent membrane protein 1,LMP1）對(duì)人B淋巴細(xì)胞株增殖與周期的影響、對(duì)免疫功能調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白的調(diào)控,并初步探究其作用機(jī)制。方法（1）將LMP1序列連入pcDNA3.1-EF1a-mcs-3flag-CMV-EGFP載體,通過電穿孔法轉(zhuǎn)染EBV陰性人B淋巴瘤細(xì)胞株Ramos細(xì)胞,利用遺傳霉素（Geneticin,遺傳G418）篩選較為穩(wěn)定過表達(dá)LMP1的Ramos細(xì)胞,行RT-PCR與Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-EF1a-mcs-3flag-CMV-EGFP-LMP1后Ramos細(xì)胞的LMP1表達(dá)情況。（2）利用CCK8法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,檢測(cè)細(xì)胞增殖能力。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期分布,qRT-PCR檢測(cè)促凋亡基因Bax與抑凋亡基因Bcl-2 mRNA表達(dá)。（3）Western Blot與免疫熒光法檢測(cè)干擾素調(diào)節(jié)因子7（interferon regulatory factor7,IRF7）在細(xì)胞中的定量與定位,免疫共沉淀初步篩選LMP1在Ramos細(xì)胞中的相互作... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

菌落檢測(cè)PCR陽(yáng)性克隆M：DNAmaker1-9：挑取的單克隆感受態(tài)細(xì)胞

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文181.3LMP1過表達(dá)細(xì)胞株建立后綠色熒光觀察倒置顯微鏡下可見轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細(xì)胞表現(xiàn)綠色熒光，細(xì)胞狀態(tài)良好，見圖2。圖2熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-EF1a-mcs-3FLAG-CMV-EGFP的Ramos細(xì)胞A：白光下B：激發(fā)光下1.4質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后LMP1mRNA的表達(dá)取水為擴(kuò)增模板作為陰性對(duì)照，可見未擴(kuò)增出GAPDH、LMP1片段；可見Ramos細(xì)胞cDNA能擴(kuò)增出GAPDH片段而不能擴(kuò)增LMP1片段；LMP1過表達(dá)的細(xì)胞可擴(kuò)增出GAPDH與LMP1片段；LMP1重組質(zhì)粒作為陽(yáng)性對(duì)照可擴(kuò)增LMP1未能擴(kuò)增GAPDH，如圖3。圖3PCR檢測(cè)LMP1的表達(dá)

PCR檢測(cè)LMP1的表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3135405