背景與目的:原發(fā)性肝癌（primary liver cancer,PLC）是世界范圍內(nèi)最常見的消化道惡性腫瘤的一種,治療效果差,每年新增患病人數(shù)高達60萬例。其起病隱匿且潛伏期長,多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已為中晚期,故生存預(yù)后差。目前臨床上迫切地需要開發(fā)有效的治療方法。甲胎蛋白（alpha fetoprotein,AFP）是一種來源于胚胎內(nèi)胚層組織細胞的糖蛋白,是一種胚胎性腫瘤相關(guān)蛋白。在大多數(shù)肝癌患者血清中呈高表達,除了肝癌,胃癌、胰腺癌和生殖系統(tǒng)的惡性腫瘤也通常伴有小劑量的甲胎蛋白升高。目前已被普遍作為一種輔助肝癌診斷及預(yù)測肝癌復(fù)發(fā)的腫瘤標(biāo)記物。近年來,關(guān)于甲胎蛋白越來越多的研究表明,甲胎蛋白在腫瘤細胞的增殖、凋亡、侵襲等過程中發(fā)揮著廣泛的作用,我們本課題的目的就是觀察甲胎蛋白（AFP）基因沉默對肝癌細胞遷移黏附能力的影響,并探討其作用機制。方法:在我們的方法中首先構(gòu)建p Silencer3.0-H1-AFP質(zhì)粒,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染肝癌細胞系EGHC-9901,實驗中將轉(zhuǎn)染后的肝癌細胞系EGHC-9901分為3組,實驗組（轉(zhuǎn)染p Silencer3.0-H1-AFP質(zhì)粒）、載體對照組（轉(zhuǎn)染空載... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【圖文】：

免疫印跡檢測轉(zhuǎn)染前后EGHC-9901甲胎蛋白表達：收集對數(shù)期生長細胞，改良lorry法定量，計算待測樣品濃度，電泳，PVDF膜上電轉(zhuǎn)移，脫脂奶粉封閉，敷封閉液稀

showed that the amount of alpha-fetoprotein expression in the experimental group wassignificantly lower than that in the vector control group and the blank control group, thedifference was statistically significant, suggesting that the expression of alpha-fetoprotein wassuccessfully inhibited. * P < 0.05, experimental group vs vector control group or blank controlgroup. The independent experiment was repeated three times.2 沉默 AFP 基因表達對各組細胞遷移能力的影響腫瘤細胞的遷移能力增強是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的機制之一，本文實驗中我們在獲得穩(wěn)定表達 AFP-siRNA 肝癌細胞系 EGHC-9901 后，采用 Transwell 小室檢測轉(zhuǎn)染前后細胞趨化遷移能力的變化。以胎牛血清作為趨化因子，鏡下隨機選取5~8 個視野進行穿膜細胞數(shù)計數(shù)，結(jié)果如圖 2 所示，獨立試驗重復(fù) 3 次。實驗組穿膜細胞數(shù)為 132±16，載體對照組為 335±21，空白對照組為 371±32，實驗組與載體對照組、空白對照組相比，P<0.05，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，如表 1 所示。這表明沉默 AFP 基因表達能夠顯著抑制肝癌細胞的遷移能力，從而表明此種效應(yīng)可能會有效的抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移與侵襲。

圖 3 細胞聚集實驗檢測細胞與細胞之間黏附能力：實驗組細胞于鏡下可見大量的細胞團塊狀組織，而轉(zhuǎn)染空載體及未處理組可見大量散在的細胞及小的細胞團塊。Fig 3 Cell aggregation assay was used to detect the adhesion between cells: A large numbof cell masses were observed in the experimental group under the microscope, while a largnumber of scattered cells and small cell masses were observed in the transfected empty vectogroup and the untreated group.

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3131578