近年來煙草野火病已成為黑龍江省煙草行業(yè)的主要病害之一,充分利用抗源材料培育抗性煙草品種是應(yīng)對該病害的有效途徑。雖然現(xiàn)有抗病煙草材料中抗病基因的性質(zhì)及抗病機(jī)制尚不明了,但在番茄中Pto基因通過ETI（Effector-triggered immunity）路徑對抗該病害的機(jī)制已早有報(bào)道。長花煙（Nicotiana alata Link et Otto）是煙草野火病0號(hào)小種的抗源材料,本文錨定ETI路徑選擇了一源自轉(zhuǎn)錄組分析中的候選基因NL-HERK,通過過表達(dá)和RNAi策略檢驗(yàn)其功能,為長花煙中ETI路徑闡釋提供研究基礎(chǔ)。本研究構(gòu)建長花煙NL-HERK過表達(dá)載體pROK II-NL-HERK及番茄Po基因過表達(dá)載體pROK II-Topto。以感病煙草LJ0520為受體材料,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,獲得轉(zhuǎn)長花煙NL-HERK的煙草株共24株;以感病煙草LJ911為受體材料,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,獲得轉(zhuǎn)番茄Pto的煙草共18株。采用針刺法對上述轉(zhuǎn)基因煙草和野生型煙草進(jìn)行病理試驗(yàn)并進(jìn)行分子鑒定,結(jié)果發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)基因煙草對煙草野火病并未產(chǎn)生抗性。為進(jìn)一步驗(yàn)證NL-HERK的功能,構(gòu)建... 

【文章來源】：牡丹江師范學(xué)院黑龍江省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線??Ｆｉｇ．?２－１?Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ?Ｒｏｕｔｅ??

圖３－１－１煙草基因組ＤＮＡ??Ｆｉｇ．?３－１－１?Ｔｏｂａｃｃｏ?ｇｅｎｏｍｉｃ?ＤＮＡ??因組ＤＮＡ為模板，以ＮＬ－ＨＥＲＫ１－Ｆ／ＮＬ－ＨＥＲ片段大小為１４２１?ｂｐ，經(jīng)１％瓊脂糖凝膠電泳現(xiàn)特異性條帶，說明ＰＣＲ擴(kuò)增成功。??■??????圖３－１－２目的基因的擴(kuò)增??ＭａｒｋｅｒＤＬ２０００?；?ｈ?ＰＣＲ?產(chǎn)物??

建??擴(kuò)增??法提取長花煙煙草基因組ＤＮＡ，結(jié)果如圖３－１－１，主板。??ｍｍ??圖３－１－１煙草基因組ＤＮＡ??Ｆｉｇ．?３－１－１?Ｔｏｂａｃｃｏ?ｇｅｎｏｍｉｃ?ＤＮＡ??煙基因組ＤＮＡ為模板，以ＮＬ－ＨＥＲＫ１－Ｆ／ＮＬ－ＨＥＲＫ１－目的片段大小為１４２１?ｂｐ，經(jīng)１％瓊脂糖凝膠電泳檢測，?ｂｐ出現(xiàn)特異性條帶，說明ＰＣＲ擴(kuò)增成功。??


本文編號(hào)：3123173