中國大鯢（Chinese giant salamander,Andrias davidianus）是我國二級保護(hù)動物,也是世界上現(xiàn)存最大的兩棲動物。大鯢屬于野生動物從水生動物向陸生動物過渡的物種,其在研究物種起源、進(jìn)化,生物多樣性、基因變異等方面具有重要的科學(xué)意義。不僅如此,近年來我國大鯢人工養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大,由大鯢虹彩病毒（Chinese giant salamander iridovirus,GSIV）引起的病毒性疾病給大鯢的養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,因而研究大鯢抗病毒防御機(jī)制對其病毒性疾病的防控具有重要的意義。Mx蛋白是由干擾素誘導(dǎo)產(chǎn)生的效應(yīng)因子,因其具有抵抗黏液病毒的能力而命名編碼Mx蛋白的基因為Mx（myxovirus resistance）基因。Mx蛋白廣泛存在于脊椎動物與無脊椎動物體內(nèi),在各組織內(nèi)廣泛表達(dá),且具有廣譜的抗病毒活性。目前,Mx基因在哺乳動物、禽類、魚類等的研究中都有相關(guān)報道,而兩棲類動物Mx的抗病毒功能研究鮮有報道。本文以中國大鯢為研究對象,采用RT-PCR技術(shù)研究了Mx基因在大鯢不同組織中的表達(dá)模式及GSIV感染后在不同組織及細(xì)胞中的表達(dá)模式;通過構(gòu)建... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

PCR擴(kuò)增AdMx基因ORFFig.2-1PCRamplificationresultsofAdMxgeneORF

2.1.2陽性克隆的篩選與酶切鑒定針對目的基因所在區(qū)域的凝膠，我們應(yīng)首先對其進(jìn)行切膠回收。與此同時，針對膠回收及pEGFP-N1載體的產(chǎn)物，行雙酶切操作。而后有效連接酶切產(chǎn)物，并使其在大腸桿菌DH5α中得以轉(zhuǎn)化，在LB固體培養(yǎng)板上對其進(jìn)行涂抹之后，將其置于37℃的恒溫培養(yǎng)箱中，在培養(yǎng)板中有較大單個菌落長出的情況下，將其挑出應(yīng)用于PCR驗證實驗，最終的實驗結(jié)果可參考下圖2-2。而后將那些經(jīng)過擴(kuò)增，且與預(yù)期條帶大小一致的菌液送至天一輝遠(yuǎn)生物科技有限公司進(jìn)行測序，將測序正確的菌液擴(kuò)大培養(yǎng)后提取超純質(zhì)粒，用于之后的細(xì)胞過表達(dá)實驗。圖2-2菌落PCR篩選AdMx基因ORF陽性克隆M：(Marker)DL20004-1；：xORFAdM陽性克隆xforclonespositiveScreening2-2Fig.PCRcolonybacterialbygeneORFAdMxforclonespositiveScreening:4-1(Marker);DL2000:MgeneORFAdM20

圖2-4大鯢AdMx和其它物種Mx基因的氨基酸序列比對xofsequenceacidaminotheofalignmentMultipleThe4-2FigotherwithcomparisoninAdMspeciesTheGenBankaccessionnumbersofthealignedsequencesareasfollows：GallusgalluMx：CAA80686.1;HaliotisdiscusdiscusMx：CAA80686.1;XenopustropicalisMx1：XP-012813710;AcipenserdabryanusMx：QCB64364;MusmusculusMx1：NP_034976.1;MusmusculusMx2：NP_038634.1;DaniRerioMxA：XP-017206546;HomosapiensMx1：NP_001171517，HomosapiensMx2：NP_002454;CheloniamydasMx1：EM_P31450.23


本文編號：3122656