近年來,大豆進口量不斷增多,且轉(zhuǎn)基因大豆占很大比例,市場上轉(zhuǎn)基因大豆制品隨處可見,基于以上情況,我國本土非轉(zhuǎn)基因大豆可能存在被污染的風(fēng)險。因此,我們選擇706份國內(nèi)大豆品種（品系）,進行轉(zhuǎn)基因成分的PCR定性檢測。本文對大豆中可能含有的多個調(diào)控元件Ca MV35S啟動子、FMV35S啟動子和NOS終止子、以及針對我國批準(zhǔn)進口的主要耐除草劑轉(zhuǎn)基因大豆轉(zhuǎn)化體GTS40-3-2和MON89788含有的目的基因EPSPS進行PCR檢測,同時通過對MON89788轉(zhuǎn)化體序列自行設(shè)計EPSPS引物序列,擴增出381 bp目的條帶,為建立MON89788大豆轉(zhuǎn)化體特異性定性PCR檢測方法,設(shè)計5’端和3’端旁側(cè)序列引物,擴增出445 bp和340 bp的產(chǎn)物,此方法可適用于MON89788大豆的特異性檢測。在706份大豆品種中,最終測得含有Ca MV35S啟動子的轉(zhuǎn)基因成分所占比例為1%,含有FMV35S啟動子的轉(zhuǎn)基因成分所占比例為0.85%,含有NOS終止子的轉(zhuǎn)基因成分所占比例為0.71%,含有EPSPS目的基因的轉(zhuǎn)基因成分所占比例為0.85%,耐除草劑轉(zhuǎn)基因品系MON89788所占比例為0.85... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

大豆樣品基因組DNA電泳檢測Fig.2-1DNAelectrophoresisofsoybeansamples

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章大豆轉(zhuǎn)基因成分檢測技術(shù)研究13圖2-2大豆樣品內(nèi)源基因Lectin檢測結(jié)果注：“M”：DL2000DNAmarker，“+”：陽性對照，“-”：陰性對照，“C”：空白對照，1：P80081，2：P80166，3：P80306，4：P70059，5：P70167，6：P70188。Fig.2-2DetectionresultsoftheendogenousgeneLectininsoybeansamplesNote:MisDL2000Marker,"+"ispositivecontrol,"-"isnegativecontrol,Cisblankcontrol,1:P80081,2:P80166,3:P80306,4:P70059,5:P70167,6:P70188.2.4.4外源基因的檢測外源基因的檢測包括調(diào)控元件的檢測和目的基因的檢測。轉(zhuǎn)基因植物中最常用到的調(diào)控元件為CaMV35S啟動子、FMV35S啟動子和NOS終止子，基于這幾種調(diào)控元件的大量使用，對啟動子和終止子的檢測可作為所檢測樣品是否為轉(zhuǎn)基因作物的初步判斷。由于抗除草劑在我國已獲得批準(zhǔn)生產(chǎn)加工，因此對EPSPS基因作為靶基因也進行檢測。此外耐除草劑大豆GTS40-3-2和MON89788轉(zhuǎn)化體是目前種植面積最廣的轉(zhuǎn)基因大豆品種，而且GTS40-3-2和MON89788轉(zhuǎn)化體分別在2004年和2008年首次獲得我國農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的進口安全證書，僅可用于原料加工的進口安全證書，GTS40-3-2含有CaMV35S啟動子和NOS終止子，MON89788含有FMV35S啟動子和T-E9終止子，本研究基于上述元件的檢測結(jié)果，根據(jù)GTS40-3-2和MON89788轉(zhuǎn)化體側(cè)翼序列和目的基因設(shè)計引物做特異性檢測，為其定性檢測提供技術(shù)支撐，因此對兩種轉(zhuǎn)化體也進行檢測。（1）CaMV35S啟動子基因CaMV35S啟動子是指來自花椰菜花葉病毒(CaMV)的35S啟動子。20世紀80年代,Chua和洛克菲勒大學(xué)的合作者在感染了花椰菜花葉病毒(CaMV)的植物中分離出了一種啟動子,該啟動子負責(zé)花椰菜花葉病毒(CaMV)的整個基因組的轉(zhuǎn)錄表達,它的沉降系數(shù)是35S,因此,這個啟動子?

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章大豆轉(zhuǎn)基因成分檢測技術(shù)研究14圖2-3CaMV35S啟動子檢測結(jié)果注：“M”：DL2000DNAmarker，“+”：陽性對照，“-”：陰性對照，“C”：空白對照，1：P60101，2：P70111，3：P70122，4：P70163，5：P70164，6：P70171，7：P70175。Fig.2-3DetectionresultsofCaMV35SpromoterNote:MisDL2000Marker,"+"ispositivecontrol,"-"isnegativecontrol,Cisblankcontrol,1:P60101,2:P70111,3:P70122,4:P70163,5:P70164,6:P70171,7:P70175.（2）NOS終止子基因NOS終止子是轉(zhuǎn)基因植物中使用最多的終止子。目前，已有39％的轉(zhuǎn)基因商業(yè)化作物中含有NOS終止子，如抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆、抗草甘膦轉(zhuǎn)基因玉米Bt11和GA21等，檢測該基因也作為篩選轉(zhuǎn)基因植物的常用方法之一。對706個樣品進行全部篩查，最終檢測到P60084、P70111、P70150、P70175和P80162含有NOS終止子（圖2-4）。圖2-4NOS終止子檢測結(jié)果注：“M”：DL2000DNAmarker，“+”：陽性對照，“-”：陰性對照，“C”：空白對照，1：P60084，2：P70111，3：P70150，4：P70175，5：P80162。Fig.2-4DetectionresultsofNOSterminatorNote:MisDL2000Marker,"+"ispositivecontrol,"-"isnegativecontrol,Cisblankcontrol,1:P60084,2:P70111,3:P70150,4:P70175,5:P70162.（3）FMV35S啟動子基因FMV35S啟動子基因即玄參花葉病毒35S啟動子是植物遺傳操作常用標(biāo)記基因，很多轉(zhuǎn)基因植物（如轉(zhuǎn)基因大豆品系MON89034等）含有FMV35S啟動子基因，同時也是檢測轉(zhuǎn)基因植物的重要指標(biāo)。對706個樣品進行全部篩查，最終檢測到P70059、P70167、P70188、P80081、P80166和P80306含有FMV35S啟動子（圖2-5）。

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