作物病害是限制農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的主要原因之一。通常植物通過兩種途徑來抵御病害,分別是基礎(chǔ)抗性（PTI）和基因?qū)蚩剐裕‥TI）,其中在ETI途徑中發(fā)揮主要作用的就是抗性基因（R基因）,它可以編碼產(chǎn)生ETI系統(tǒng)中的免疫受體。利用R基因培育抗性品種是防治作物病害最為直接、環(huán)保、有效的手段。大多數(shù)的R基因都可以編碼含有卷曲螺旋結(jié)構(gòu)、核苷酸結(jié)合位點(diǎn)和富含亮氨基酸重復(fù)序列（CC-NBS-LRR）結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)。番茄是全世界種植最為廣泛的一種經(jīng)濟(jì)作物,在果蔬供應(yīng)中占有至關(guān)重要的地位。細(xì)菌性斑點(diǎn)病對(duì)番茄的生產(chǎn)構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅,深入研究細(xì)菌性斑點(diǎn)病的致病機(jī)理不僅為改良番茄育種提供了新的線索而且對(duì)提高番茄品質(zhì)起到了重要的指導(dǎo)作用。番茄中的DDB1作為CRL4泛素連結(jié)酶復(fù)合體的核心成分,通過靶向修飾不同底物蛋白的豐度和活性參與調(diào)控多種生物學(xué)功能,包括葉綠體發(fā)育、果實(shí)大小和抗病應(yīng)答等。前期的研究發(fā)現(xiàn),番茄的DDB1功能缺失突變體hp1表現(xiàn)出對(duì)病原菌高敏感性。為了進(jìn)一步研究DDB1在番茄中的抗病功能,我們以DDB1為誘餌通過酵母雙雜交篩選得到了一個(gè)番茄的抗性基因SlNBRP1。通過基因表達(dá)模式分析和亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)我... 

【文章來源】：合肥工業(yè)大學(xué)安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

SlNBRP1和DDB1的免疫共沉淀分析

圖 3.6 SlNBRP1 酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)Fig 3.6 Yeast two-hybrid assay of SlNBRP1含有 X-Gal 的三缺篩選培養(yǎng)基（-His, -Trp, -Ura），由左至右依次G202::SlNBRP1--pJG4-5::DDB1；pEG202::SlNBRP1--pJG4-5::CupEG202::SlNBRP1--pJG4-5::空載 pEG202::DDB1--pJG4-5::NacP1 受 UPS 系統(tǒng)（Ubiquitin Proteasome System）調(diào)控降解2 是蛋白酶體抑制劑，通過添加與不添加 MG132 觀察蛋白目的蛋白是否受泛素-蛋白酶體系統(tǒng)（UPS）的降BRP1-Flag 同 pTEX::GFP-Flag ， 以 及 pTEX::SlGL-Flag 共同轉(zhuǎn)入煙草葉片原生質(zhì)體中，其中以 SlGLK2 組P 作為參照。結(jié)果如圖 3.7 所示，SlGLK2 組合中添加 M不加的信號(hào)要強(qiáng)，且四個(gè)泳道中 GFP 的信號(hào)強(qiáng)弱是一致可信的。在 SlNBRP1 組合中，添加 MG132 的泳道蛋白信多，說明 SlNBRP1 蛋白是 UPS 系統(tǒng)調(diào)控降解的。

圖 3.8 SlNBRP1番茄原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)lNBRP1 tomato protoplast transformatio載體的構(gòu)建基因擴(kuò)增NA 為模板，分別用 NBRP1-F1/R1 和脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果如圖 3.9 的 SlNBRP1 基因一致。 3.9 番茄 SlNBRP1 基因全長(zhǎng)序列擴(kuò)增產(chǎn)he production of SlNBRP1 gene full len

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]番茄中SISINA泛素連接酶家族的功能分析及對(duì)果實(shí)生長(zhǎng)發(fā)育的影響[D]. 王文杰.合肥工業(yè)大學(xué) 2018

碩士論文
[1]番茄SlCDT1調(diào)控植物生長(zhǎng)發(fā)育功能的研究[D]. 胡鑫.合肥工業(yè)大學(xué) 2018
[2]番茄OFP20基因的克隆及功能初步分析[D]. 趙春燕.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[3]番茄丁香假單胞菌抗病基因Pto互作蛋白功能分析[D]. 劉瑩.合肥工業(yè)大學(xué) 2017
[4]番茄中一個(gè)抗病基因的遺傳轉(zhuǎn)化及抗病性的初步研究[D]. 許偉.合肥工業(yè)大學(xué) 2016
[5]番茄胞嘧啶甲基轉(zhuǎn)移酶同源基因SlMET1的功能初探[D]. 曹徐綠.合肥工業(yè)大學(xué) 2016
[6]玉米BK2L3基因過表達(dá)載體的構(gòu)建及在番茄中的遺傳轉(zhuǎn)化[D]. 楊瀟怡.合肥工業(yè)大學(xué) 2015
[7]番茄GRAS轉(zhuǎn)錄因子家族基因SlFSR的克隆及其功能研究[D]. 任麗軍.重慶大學(xué) 2014
[8]番茄在中國的傳播及其影響研究[D]. 劉玉霞.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



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