高鹽度和干旱可以誘導植物體產(chǎn)生過量的活性氧（ROS）,導致對DNA、蛋白質(zhì)和脂類等生物大分子的氧化損傷。而蛋白質(zhì)中的含硫氨基酸甲硫氨酸（Met）很容易被ROS氧化,形成S型甲硫氨酸亞砜（Met-S-SO）和R型甲硫氨酸亞砜（Met-R-SO）。機體內(nèi)的甲硫氨酸亞砜還原酶（methionine sulfoxide reductase,MSR）可以還原氧化型的甲硫氨酸。雖然已有研究表明生物中的MSR可以響應多種逆境反應,但對于玉米中的MSR的作用缺少實驗證據(jù),本論文主要對ZmMSRA2和-A5.1的抗逆功能及作用機制進行了初步探究。1 ZmSRA2的功能及作用機制生物信息學分析顯示,ZmMSRA2編碼蛋白包含一個高度保守的C端的PMSR結(jié)構(gòu)域,亞細胞定位結(jié)果顯示ZmMSRA2定位在細胞質(zhì),酶活測定結(jié)果顯示過表達系的MSR酶活與野生型相比顯著提高。前期qPCR分析發(fā)現(xiàn)NaCl、PEG處理后,ZmMSRA2表達上調(diào);在NaCl、Mannitol、H202以及ABA處理下,轉(zhuǎn)基因擬南芥株系的主根長度顯著增加,耐逆能力強于對照。在滲透脅迫處理下,與野生型相比,過表達系種子萌發(fā)較快。測量各株系的抗氧... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

在PEG和NaCI脅迫下ZmMSRA2基因的表達模式分析(Zhueta1.,20I5Figure3-1TheeXpressionpatternanalysisofZmM

３．２?基因和蛋白序列分析??ＺｗＭＳ■兄＾基因的ＣＤＳ為５５５?ｂｐ，由兩個外顯子和一個內(nèi)含子構(gòu)成（圖３－２，??Ａ）。ＺｍＭＳＲＡ２蛋白由１８５個氨基酸組成，分子量為２０．５ｋＤａ。蛋白的二級結(jié)??構(gòu)主要由ＰＭＳＲ結(jié)構(gòu)域組成，其位于蛋白序列的第２５－１７５位氨基酸（圖３－２，?Ｂ），??ＰＭＳＲ結(jié)構(gòu)域為甲硫氨酸亞砜還原酶Ａ家族特有。??Ａ?ｒ??Ｃｂｐ?１ＣＣＣ＾?ｌｆ３０ｂｐ?３ｃ〇ｂｐ??Ｌｅｇｅｎｄ??■?Ｅｒｏｎ?—?Ｉｃｔｉｎｎ??Ｐｆａｍ??｜ｆ￡?－?ｖ??■＾ＢＰＭＳＲ??圖３－２?基因及蛋白二級結(jié)構(gòu)分析。Ａ．外顯子／內(nèi)含子結(jié)構(gòu)分析；黑色框代表外顯子，??黑色線代表內(nèi)含子；Ｂ．蛋白二級結(jié)構(gòu)分析??Ｆｉｇｕｒｅ?３－２?Ｔｈｅ?ｇｅｎｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ａｎｄ?ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ?ｄｏｍａｉｎ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＺｍＭＳＲＡｌ．／Ｋ．Ｔｈｔ?ｅｘｏｎ－ｉｎｔｒｏｎ??ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ?ｏｆ?ＺｍＭＳＲＡ２?ｇｅｎｅｓ．Ｔｈｅ?ｂｌａｃｋ?ｂｏｘｅｓ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?ｅｘｏｎｓ；ｔｈｅ?ｂｌａｃｋ?ｓｏｌｉｄ?ｌｉｎｅｓ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ??ｉｎｔｒｏｎｓ；Ｂ．ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ?ｄｏｍａｉｎ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆＺｍＭＳＲＡ２．??３．３基因序列同源分析??對擬南芥、水稻、小麥、短柄草、高粱、小米以及玉米ＭＳＲＡ２蛋白序列進??行系統(tǒng)發(fā)育樹分析（圖３－３）。結(jié)果顯示，ＺｗＭＳ兄４２與幼ＭＳ／Ｌ４２．／的同源性最??聞，局達９２％，暗不—者可能具有類似的功能，與擬南芥的同源性只有５２?％。??５

３．６原核表達??為篩選與ＺｍＭＳＲＡ２蛋白互作的抗逆底物，我們構(gòu)建了原核表達載體??（含有?Ｈｉｓ?標簽，用于?Ｐｕｌｌ－ｄｏｗｎ?實驗），轉(zhuǎn)入?￡．ｃｏ／／ＢＬ２１?中，??測序。選擇測序正確的陽性菌株分別在不同溫度、不同濃度ＩＰＴＧ的條件下進行??誘導。實驗結(jié)果表明，在１８°Ｃ，?０．５ｍＭＩＰＴＧ條件下，ＺｍＭＳＲＡ２表達的蛋白??隨著誘導時間的延長，其積累量逐漸增多，可知此條件下目的蛋白可以被誘導出??來。純化結(jié)果顯示，ＺｍＭＳＲＡ２蛋白分子量為２０．５ｋＤａ?（圖３－５，箭頭所指位置）。??Ａ?Ｍ?Ｏｈ?ｌｈ?３ｈ?５ｈ?Ｂ??ｋＤａ?；：?．?ｋＤａ??１７０－?＾?１７０－?ｗ?ＪＨ??１３０－?，?．．．．?１３０－??ｌｏｏ—?ｉ；＾??

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3113209