目的分析短發(fā)夾RNA（shRNA）介導(dǎo)DEAD-box解螺旋酶46（DDX46）基因沉默對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響。方法采用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-qPCR）和蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）測(cè)定人正常乳腺上皮細(xì)胞系和乳腺癌細(xì)胞系中DDX46表達(dá)差異。以慢病毒介導(dǎo)的shRNA敲低乳腺癌SK-BR-3細(xì)胞中DDX46的表達(dá),實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組和sh-DDX46組。RT-qPCR檢測(cè)各組細(xì)胞DDX46 mRNA的表達(dá)水平,蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)DDX46蛋白和凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平,克隆形成和四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法（MTT法）檢測(cè)細(xì)胞生長增殖,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。結(jié)果 DDX46mRNA在各乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)量均高于正常乳腺上皮細(xì)胞（P<0.05）。sh-DDX46組細(xì)胞DDX46 mRAN和蛋白表達(dá)水平均明顯低于空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組（P<0.05）。sh-DDX46組的細(xì)胞生長增殖能力明顯低于兩對(duì)照組（P<0.05）�？瞻讓�(duì)照組、陰性對(duì)照組和sh-DDX46組SK-BR-3細(xì)胞凋亡率分別為（4.21±1.65）%、（5.36±1.... 

【文章來源】：安徽醫(yī)藥. 2020,24(12)

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【部分圖文】：

蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)DEAD-box解螺旋酶46(DDX46）蛋白的表達(dá)水平

DDX46與結(jié)直腸癌、食管癌、骨肉瘤等惡性腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡相關(guān)。Li Ming等[8]的研究表明87%的結(jié)直腸腺癌病人核DDX46染色水平較高，與癌旁組織相比，結(jié)直腸癌組織中DDX46蛋白表達(dá)明顯增加。用DDX46 RNAi慢病毒沉默人結(jié)腸癌細(xì)胞中DDX46在的表達(dá)后，MTT及克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞生長增殖明顯減少，DDX46沉默通過增加cleaved Caspase-3和cleaved PARP的表達(dá)導(dǎo)致凋亡誘導(dǎo)，DDX46對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖至關(guān)重要，是結(jié)直腸癌治療的潛在治療靶點(diǎn)。Li Bin等[10]、李斌等[18]通過sh RNA干擾技術(shù)靶向沉默食管癌TE-1細(xì)胞DDX46表達(dá)，沉默DDX46可通過下調(diào)Akt/NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。另有研究報(bào)道DDX46可通過調(diào)節(jié)的骨肉瘤Sa OS2細(xì)胞中PI3K和Akt的磷酸化水平，影響骨肉瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和體內(nèi)腫瘤的生長[11]。與上述研究類似，本研究參考張淑芳等[14]的實(shí)驗(yàn)方法，通過慢病毒sh RNA轉(zhuǎn)染乳腺癌SK-BR-3細(xì)胞，建立穩(wěn)定細(xì)胞系，細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)和MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)表明沉默DDX46表達(dá)可顯著抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖和生長，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)DDX46基因沉默后乳腺癌細(xì)胞凋亡率明顯增加。凋亡是細(xì)胞維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要方式，也是腫瘤細(xì)胞死亡的主要方式[19-20]。本研究應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法對(duì)凋亡通路蛋白進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，沉默DDX46后可誘導(dǎo)凋亡通路中的抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)下調(diào)，促凋亡蛋白Bax表達(dá)增強(qiáng)，同時(shí)凋亡關(guān)鍵蛋白Cleaved Caspase-3表達(dá)上調(diào)，提示沉默DDX46可能通過調(diào)節(jié)凋亡通路蛋白的表達(dá)誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡。

綜上所述，本研究結(jié)果表明DDX46在乳腺癌細(xì)胞系中高表達(dá)，沉默DDX46表達(dá)可抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖，并通過調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax和cleaved Caspase-3的表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞凋亡，凋亡信號(hào)通路可能是其作用機(jī)制之一。本研究不足之處在于只選用一種人乳腺癌細(xì)胞系，且只在細(xì)胞層面初步探討了DDX46的作用，在今后的研究中我們會(huì)對(duì)上述問題進(jìn)行進(jìn)一步研究，增加動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床預(yù)后分析，并對(duì)其相關(guān)作用機(jī)制進(jìn)行深入探討。

【參考文獻(xiàn)】：
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