目的:利用pGCSIL-GFP/GTPBP4-RNAi慢病毒載體轉(zhuǎn)染人結(jié)腸癌細胞HT29,沉默GTPBP4基因,探究GTPBP4 RNAi對HT29細胞生物學行為的影響。方法:1.慢病毒最佳感染復(fù)數(shù)（multiplicity of infection,MOI）的篩選及細胞轉(zhuǎn)染慢病毒GTPBP4 RNAi載體及陰性對照慢病毒載體由上海吉凱基因公司包裝完成;預(yù)實驗用慢病毒轉(zhuǎn)染人HT29細胞篩選出最佳感染復(fù)數(shù)（multiplicity of infection,MOI）,用篩選出的最佳MOI進行正式轉(zhuǎn)染實驗。將處于對數(shù)生長期的HT29細胞分為實驗組和陰性對照組,于轉(zhuǎn)染前一天鋪板,轉(zhuǎn)染細胞72h后熒光顯微鏡下觀察GFP標記所激發(fā)出的熒光豐度,以此初步判斷細胞轉(zhuǎn)染效率。2.Real-time PCR及Western blot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染慢病毒后GTPBP4基因mRNA和蛋白水平的沉默效率（1）慢病毒轉(zhuǎn)染細胞72h后,分別提取實驗組和對照組HT29細胞總RNA,根據(jù)Takara公司逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書合成cDNA,采用Real-time PCR檢測GTPBP4基因mRNA表達水平;（2）慢病毒轉(zhuǎn)染細... 

【文章來源】：西南醫(yī)科大學四川省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

慢病毒轉(zhuǎn)染HT29細胞72h后，熒光顯微鏡下觀察細胞轉(zhuǎn)染效率（A、B:實驗組細胞分別在熒光、白光下所觀察的視野；C、D:陰性對照組細胞分別在熒光、白光下所觀察的視野）

定量 PCR 檢測準染后 GTPBP4 在 mRNA 水平表達ion of GTPBP4-mRNA in HT29 transfected with lentivPCR(*P<0.05)熒光定量 PCR 檢測準染后 GTPBP4 在 mRNA 水平n of GTPBP4-mRNA in HT29 transfected with lentiviruroup NGTPBP4 mRNA,ntrol 3 0.99±0.55P4 RNAi 3 0.03±0.12P 0.001tern blot 檢測顯示經(jīng) GTPBP4 RNAi 轉(zhuǎn)染的較，GTPBP4 蛋白水平明顯下降（圖 3），與

3 GTPBP4 RNAi 轉(zhuǎn)染 HT29 細胞后蛋白水平的敲減on of GTPBP4 protein in HT29 transfected with lentivir GTPBP4 基因?qū)?HT29 細胞生物學行為的影測細胞增殖能力驗檢測發(fā)現(xiàn)實驗組的 OD 值分別在 24h，48h陰性對照組（圖 4），且兩組之間差異具有統(tǒng)），GTPBP4 RNAi 轉(zhuǎn)染后，細胞的增殖能力與 HT29 細胞增殖能力相關(guān)。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3106563