核受體基因家族是介導(dǎo)昆蟲蛻皮激素（20E）作用的關(guān)鍵信號分子。為了研究家蠶絲腺中核受體異源二聚體編碼基因——蛻皮激素受體基因Bm EcR和超氣門蛋白基因Bm USP的表達模式,應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測家蠶5齡幼蟲正常狀態(tài)下和用2×10^-3μg/μL蛻皮激素處理后Bm EcR與Bm USP在絲腺組織中的表達變化。結(jié)果表明,20E處理后,Bm EcRA、Bm EcR-B1和Bm USP在中、后部絲腺的表達量與對照組相比均有不同程度增加,說明20E能夠促進Bm EcR-A、Bm EcR-B1和Bm USP基因的表達;但中部絲腺與后部絲腺Bm EcR-A、Bm EcR-B1和Bm USP基因的表達變化趨勢不同。利用等溫滴定量熱技術(shù)（ITC）獲得的家蠶蛻皮激素受體結(jié)構(gòu)域蛋白Bm EcR-B1D與蛻皮激素響應(yīng)元件Bm E75A-EcRE及其缺失突變體相互作用的親和力常數(shù)（K）、反應(yīng)熱（ΔH）和熵（ΔS）,顯示了Bm EcR-B1D蛋白能夠與Bm E75A-EcRE進行結(jié)合,并發(fā)現(xiàn)Bm E75A-EcRE的核心保守區(qū)為編碼序列TCTTC,推測該區(qū)域有可能是Bm EcR-B... 

【文章來源】：蠶業(yè)科學(xué). 2016,42(03)北大核心CSCD

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BmEcＲ-B1D蛋白與BmE75A-EcＲE或其缺失突變體結(jié)合反應(yīng)的等溫滴定量熱試驗示意圖

428蠶業(yè)科學(xué)2016;42(3)達到最大值，20E處理組與對照組家蠶相比，后部絲腺中BmEcＲ-A、BmEcＲ-B1和BmUSP的表達上調(diào)，最高上調(diào)倍數(shù)分別為4.98、5.60和8.58。1—5齡4d，2—5齡5d，3—5齡6d，4—5齡7d，5—上蔟1d，6—上蔟2d;*P＜0.05，＊＊P＜0.01。圖3同。1—Day4ofthe5thinstar，2—Day5ofthe5thinstar，3—Day6ofthe5thinstar，4—Day7ofthe5thinstar，5—Day1aftermounting，6—Day2aftermounting.*P＜0.05，＊＊P＜0.01.ThesameinFig.3.圖220E誘導(dǎo)BmEcＲ-A(A)、BmEcＲ-B1(B)和BmUSP(C)基因在家蠶中部絲腺的表達變化Fig.2ExpressionchangeofBmEcＲ-A(A)，BmEcＲ-B1(B)andBmUSP(C)inmiddlesilkglandofBombyxmoriinducedby20E圖320E誘導(dǎo)BmEcＲ-A(A)、BmEcＲ-B1(B)和BmUSP(C)基因在家蠶后部絲腺的表達變化Fig.3ExpressionchangeofBmEcＲ-A(A)，BmEcＲ-B1(B)andBmUSP(C)inposteriorsilkglandofBombyxmoriinducedby20E2.3BmEcＲ-B1D蛋白與BmE75A-EcＲE的結(jié)合反應(yīng)圖4為在25℃條件下對BmEcＲ-B1D蛋白與BmE75A-EcＲE進行的ITC試驗結(jié)果，其中上半部分為反應(yīng)峰值，下半部分為熱力學(xué)曲線。表1為用Or-igin軟件分析得到的親和力常數(shù)(K)、反應(yīng)熱(ΔH)和熵(ΔS)等熱力學(xué)數(shù)據(jù)。試驗結(jié)果表明BmEcＲ-

第3期劉云壘等:家蠶蛻皮激素受體和超氣門蛋白基因的誘導(dǎo)表達模式及蛻皮激素響應(yīng)元件核心保守區(qū)的識別429B1D蛋白與BmE75A-EcＲE發(fā)生了結(jié)合反應(yīng)，并且該反應(yīng)為放熱反應(yīng)。結(jié)合數(shù)據(jù)分析，BmEcＲ-B1D蛋白與BmE75A-EcＲE為焓驅(qū)動過程(反應(yīng)熱ΔH＜0)，由熵(ΔS)＜0可以推斷BmEcＲ-B1D蛋白與BmE75A-EcＲE之間的主要作用力為范德華力和氫鍵。圖425℃條件下BmEcＲ-B1D蛋白與BmE75A-EcＲE相互作用的等溫滴定量熱(ITC)試驗結(jié)果Fig.4Isothermaltitrationcalorimetry(ITC)resultsofinteractionbetweenBmEcＲ-B1DandBmE75A-EcＲEat25℃表1等溫滴定量熱(ITC)試驗的反應(yīng)底物及其對應(yīng)的熱力學(xué)參數(shù)Table1Thereactionsubstratesofisothermaltitrationcalori-metry(ITC)experimentandtheircorrespondingthermodynamicparameters底物SubstrateK/(L·mol－1)ΔH/(J·mol－1)ΔS/(J·mol－1·K－1)BmE75A-EcＲE8.83E6－4.92800E5－1519.808BmE75A-EcＲE11.51E7－2.14300E3－581.965BmE75A-EcＲE25.94E6－3.86600E3－1168.110BmE75A-EcＲE3———BmE75A-EcＲE46.94E6－3.43485E3－1021.5792.4BmEcＲ-B1D蛋白與BmE75-EcＲE缺失突變體的結(jié)合情況如圖1所示，將BmE75A-EcＲE序列通過基因合成的方法按照從3'端至5'端順次缺失5bp堿基，得到的缺失突變體命名為BmE75A-EcＲE1、BmE75A-EcＲE2、BmE75A-EcＲE3和BmE75A-EcＲE4。ITC試驗結(jié)果如圖5～8所示，根據(jù)反應(yīng)峰值圖和熱力學(xué)曲線可以判斷BmEcＲ-B1D蛋白與BmE75A-EcＲE1(圖5)、BmE75A-EcＲE2(圖6)和BmE75A-EcＲE4(圖8)的反應(yīng)屬于放熱反應(yīng)，而且是一類結(jié)合位點的反應(yīng);然而，BmEcＲ-B1D蛋白與BmE75A-EcＲE3的反應(yīng)則是既不屬吸熱也不屬放熱反應(yīng)(圖7)。結(jié)果表明，BmEcＲ-B1D

【參考文獻】：
期刊論文
[1]家蠶蛻皮激素受體基因EcR-B1的啟動子調(diào)控區(qū)域活性檢測[J]. 黃明霞,杜杰,劉云壘,趙國棟,衛(wèi)正國,沈衛(wèi)德.  蠶業(yè)科學(xué). 2014(03)
[2]家蠶常用內(nèi)參基因穩(wěn)定性分析及絲蛋白相關(guān)基因表達調(diào)控研究[J]. 吳玉,翟淵粉,黃明霞,趙國棟,李兵,衛(wèi)正國,沈衛(wèi)德.  中國細胞生物學(xué)學(xué)報. 2013(04)
[3]蛻皮激素誘導(dǎo)家蠶蛻皮激素受體和超氣門蛋白基因的表達變化[J]. 蘇保錦,吳玉,趙斯斯,趙國棟,衛(wèi)正國,李兵,沈衛(wèi)德.  蠶業(yè)科學(xué). 2012(02)



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