發(fā)布時間：2021-03-27 04:00

　　豆科植物-根瘤菌共生固氮系統(tǒng)是生物固氮中效率最高的體系,無論對全球氮生態(tài)循環(huán)還是農(nóng)業(yè)都極為重要。自然或農(nóng)業(yè)生產(chǎn)條件下,豆科植物-根瘤菌共生固氮系統(tǒng)會不斷遭受著逆境脅迫。長期以來,研究多集中在可控環(huán)境下的根瘤菌結(jié)瘤與固氮機制,以及豆科植物或者根瘤菌單方面對逆境的生理生化響應(yīng)過程。作為具有緊密共生關(guān)系的根瘤菌是否以及如何幫助植物宿主抵抗不良環(huán)境仍然不清楚。深入理解大豆慢生型根瘤菌在大豆應(yīng)答干旱脅迫傷害,適應(yīng)性變化等過程中的生物學(xué)作用,對提高農(nóng)業(yè)產(chǎn)量和保護生態(tài)環(huán)境具有非常重要的意義。本研究以大豆慢生型根菌Bradyrhizobium diazoefficiens USDA110為研究對象,采用Tn5轉(zhuǎn)座誘變技術(shù),建立突變體庫,篩選脅迫環(huán)境條件型突變體,并初步探究了這些篩選突變菌株的生理生化、遺傳以及共生特征。（1）探究了野生體B.d110在三種脅迫環(huán)境（pH、NaCl和干旱）條件下的生長模式,生長受到明顯抑制（臨界生長）時的脅迫條件分別是pH4.0、0.4%NaCl和12%PEG6000。以此為脅迫條件的大豆（綏農(nóng)14號）接種實驗結(jié)果顯示,相較于非脅迫條件,無論接種與否,三種脅迫條件均顯著降... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

本研究所用mini-Tn5SSgusA20結(jié)構(gòu)

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 大豆慢生型根瘤菌突變體庫構(gòu)建及參與環(huán)境脅迫相關(guān)基因的挖掘1.2.2 Tn5 轉(zhuǎn)座子的作用機制Tn5 轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座是非復(fù)制型的，步驟復(fù)雜，它可以從遺傳物質(zhì)的一部分跳躍到另一部分，從而引起遺傳變異。首先需要轉(zhuǎn)座酶（tnp）結(jié)合到 Tn5 的 OE末端，tnp 才具有切割 DNA 的活性[30]。tnp 結(jié)合到 Tn5 后，對轉(zhuǎn)座子 DNA 鏈的一端進行切割，然后在 tnp 的活化作用下，形成平末端的 Tn5，最后整體離開供體鏈，結(jié)合到靶 DNA，然后在 DNA 聚合酶的作用下補平供體鏈和受體 DNA 的缺口[31]（圖 1.3）。

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 大豆慢生型根瘤菌突變體庫構(gòu)與環(huán)境脅迫相關(guān)基因的挖于高溫滅菌的 10ml 添加壯觀霉素 Spcr100 的 LB 液體培養(yǎng)基，37℃，180r過夜培養(yǎng)（推遲 3 天培養(yǎng)）。2.接合階段：（1）分別吸取第一步培養(yǎng)的兩種菌 2-4ml，離心棄上清，滅菌水徹底（2）清洗抗生素三次，第三次用 500μl滅菌水懸濁。（3）分別取 300μl以上兩種菌在 1.5ml 的離心管中混合，離心，棄去上清液，剩余液體懸濁菌體，此為混合菌液。（4）無菌濾膜放置在無抗的 HM 固體平板上，各吸取步驟（2）清洗體菌和受體菌 50ul 以及步驟（3）的混合菌液 50μl分別滴加在濾膜上各三（5）30℃培養(yǎng)至 3-4 天。

【參考文獻】：
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3102843