芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）是我國的傳統(tǒng)名花,因性喜冷涼干燥,多分布或栽培在我國華北、東北、西北和西南地區(qū)。近年來,隨著芍藥在園林花境景觀中的廣泛應用和芍藥高檔切花市場的興起,浙江杭州、江蘇揚州和上海等“長三角”地區(qū)紛紛從山東菏澤、河南洛陽等北方主產區(qū)開展“芍藥南移”工作。然而,由于我國江南地區(qū)夏季高溫持續(xù)時間長,使得大多數優(yōu)良芍藥品種“南移”后出現生長不良、難以展現原產地的優(yōu)良觀賞性狀。夏季高溫已然成為限制芍藥切花在南方規(guī)�；a及其在園林景觀中廣泛應用的主要因素之一,而找到調控芍藥耐高溫能力的關鍵基因對于培育耐高溫能力強的芍藥品種至關重要。為此,本研究克隆了芍藥HSP70基因并對其序列進行生物信息學分析,通過表達模式、原核表達、亞細胞定位等研究明確芍藥HSP70基因的表達特性,構建芍藥HSP70基因的超表達載體并遺傳轉化擬南芥、觀察高溫脅迫對轉基因植株的影響,從而深入了解芍藥HSP70基因在調控芍藥耐高溫能力方面的功能。主要結果如下:（1）通過RACE技術克隆了芍藥HSP70基因的cDNA全長序列,該基因長2195 bp,具有5’非編碼區(qū)（70 bp）、... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數】：69 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１通過ＲＡＣＥ方法獲得的芍藥／ｉＳ／ＶＯ基因ｃＤＮＡ片段??

Ｍ：?ＤＬ５０００；?１：?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｐ／／／５Ｐ７０??在此基礎之上，以芍藥‘紫鳳羽’葉片中所提取的ＤＮＡ為模板，通過ＰＣＲ方法進行??Ｐ／／／５Ｐ７０ＤＮＡ序列的擴増，獲得一條約為３０００?ｂｐ的條帶（圖２－３），經過擴增條帶回收、??連接、轉化、搖菌、質粒提取、測序等一系列過程后，最終拼接獲得３６３６?ｂｐ的序列。通??過序列比對，該ＤＮＡ序列具有２個外顯子和１個內含子，該內含子開始于序列ＧＴ并以ＡＧ??結束，符合Ｂｒｅａｔｈｎａｃｈ和Ｃｈａｍｂｏｎ提出的“ＧＴ－ＡＧ”剪切規(guī)律［１１８］，登錄號為ＭＦ８１７４９８?（圖??２－４、２－５）。??２１４?１７３９??ＭＦ８１７４９８?５?ｒＴ??＾??－３??｜??｜?｜?｜?｜?｜?｜?｜???Ｏｂｐ?５００ｂｐ?１０００ｂｐ?１５００ｂｐ?２０００ｂｐ?２５００ｂｐ?３０００ｂｐ?３５００ｂｐ??圖２－４?／Ｖ／／ＳＰ７０基因的ＤＮＡ結構??外顯子為灰色盒子，內含子為細線，非翻譯區(qū)為黑線??Ｆｉｇｕｒｅ?２－４?Ｇｅｎｏｍｉｃ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｐ１ＨＳＰ７０??Ｅｘｏｎｓ?ａｒｅ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ａｓ?ｇｒｅｙ?ｂｏｘｅｓ，?ｉｎｔｒｏｎｓ?ａｓ?ｌｉｎｅｓ?ａｎｄ?ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄ?ｒｅｇｉｏｎ?ｂｌａｃｋ?ａｓ?ｌｉｎｅｓ??

?１?ｄ?２ｄ?３ｄ??Ｄａｙ?ａｆｔｅｒ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??圖２－７高溫脅迫下芍藥葉片的相對含水量??Ｆｉｇｕｒｅ?２－７?Ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｗａｔｅｒ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ｉｎ?Ｐ．?ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ?ｌｅａｖｅｓ?ｕｎｄｅｒ?ｈｉｇｈ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｓｔｒｅｓｓ??采用ＤＡＢ染色法觀測了高溫脅迫下芍藥葉片中１七（）２積累水平，ＤＡＢ染色越深，表??明Ｈ２０２含量越高。從圖２－８可以看出，隨著高溫脅迫時間的推移，芍藥葉片的顏色不斷??加深，Ｈ２０２含量顯著增加。??Ｏｄ?１ｄ?２ｄ?３ｄ??Ｄａｙ?ａｆｔｅｒ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??圖２－８高溫脅迫下芍藥葉片中Ｈ２０２積累水平??Ｆｉｇｕｒｅ?２－８?Ｈ２Ｏ２?ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ?ｉｎ?Ｐ．?ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ?ｌｅａｖｅｓ?ｕｎｄｅｒ?ｈｉｇｈ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｓｔｒｅｓｓ??１１１??Ｏｄ?１?ｄ?２ｄ?３ｄ??Ｄａｙ?ａｆｔｅｒ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??圖２－９高溫脅迫下芍藥葉片中ｏ２＿積累水平??Ｆｉｇｕｒｅ?２－９?Ｏ２＇?ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ?ｉｎ?Ｐ．?ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ?ｌｅａｖｅｓ?ｕｎｄｅｒ?ｈｉｇｈ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｓｔｒｅｓｓ??采用熒光探針法觀測了高溫脅迫下芍藥葉片中〇２＿積累水平，熒光強度越強，表明??〇２－積累越多。從圖２－９可以看出

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]龍須菜熱激蛋白基因克隆及在高溫脅迫下的表達模式分析[D]. 丁艷.中國海洋大學 2014
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本文編號：3102036