豬瘟（Classical swine fever,CSF）是由豬瘟病毒（Classical Swine Fever Virus,CSFV）引起的一種流行范圍廣、高度接觸性的烈性傳染病,是威脅養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病之一。就現(xiàn)階段而言,我國并未完全掌握徹底消滅豬瘟的方法。我國控制豬瘟病毒主要是采用傳統(tǒng)疫苗。但由于豬瘟的流行形式發(fā)生了很大變化,已經(jīng)不能對(duì)豬瘟起到很好的保護(hù),因此,研究新型基因工程疫苗為大勢所趨。豬瘟病毒結(jié)構(gòu)蛋白E0（Classical swine fever virus,CSFV E0）可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體,從而使機(jī)體產(chǎn)生免疫。編碼CSFV E0蛋白的核苷酸序列保守性相當(dāng)高,因此CSFV E0蛋白可當(dāng)成一種靶蛋白來防治豬瘟。本文利用TALEN基因打靶技術(shù)將含有豬瘟病毒結(jié)構(gòu)蛋白E0基因的打靶載體定點(diǎn)整合到山羊β-乳球蛋白第一外顯子中。在山羊乳腺上皮細(xì)胞中驗(yàn)證,其能夠誘導(dǎo)表達(dá)豬瘟E0結(jié)構(gòu)蛋白,這為以轉(zhuǎn)CSFV E0基因的克隆細(xì)胞為供核細(xì)胞,進(jìn)行核移植和胚胎移植來制備高效表達(dá)豬瘟病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因E0的山羊乳腺生物反應(yīng)器奠定了基礎(chǔ)。研究內(nèi)容如下:1.CSFV E0基因在乳腺上皮細(xì)胞中的... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 豬瘟
        1.1.1 豬瘟的概述
        1.1.2 豬瘟的防控措施
    1.2 乳腺生物反應(yīng)器
        1.2.1 乳腺生物反應(yīng)器的概念
        1.2.2 乳腺生物反應(yīng)器的研究進(jìn)展
    1.3 基因編輯技術(shù)
        1.3.1 鋅指核酸酶
        1.3.2 轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶
        1.3.3 RNA介導(dǎo)的工程核酸酶
第二章 利用TALEN介導(dǎo)豬瘟病毒結(jié)構(gòu)蛋白E0基因在乳腺上皮細(xì)胞中表達(dá)
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 載體及菌株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 乳腺上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染與單克隆陽性細(xì)胞的篩選
        2.2.3 單克隆細(xì)胞中豬瘟E0（CSFV E0）基因整合位點(diǎn)的檢測
        2.2.4 豬瘟病毒E0（CSFV E0）基因表達(dá)的PCR檢測
        2.2.5 豬瘟病毒E0（CSFV E0）基因表達(dá)的定量PCR檢測
        2.2.6 豬瘟病毒E0（CSFV E0）蛋白分泌表達(dá)檢測
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 山羊乳腺上皮細(xì)胞的分離純化
        2.3.2 外源基因整合位點(diǎn)的檢測
        2.3.3 PCR檢測豬瘟病毒EO基因
        2.3.4 豬瘟病毒E0基因表達(dá)水平的檢測
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 轉(zhuǎn)豬瘟病毒E0基因打靶奶山羊的制備
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 載體及細(xì)胞
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 組織塊法培養(yǎng)山羊胎兒成纖維細(xì)胞及其凍存
        3.2.2 胎兒成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)染及克隆的篩選
        3.2.3 豬瘟E0基因在胎兒成纖維細(xì)胞中的整合檢測
        3.2.4 轉(zhuǎn)基因克隆胚的移植
        3.2.5 受體山羊的妊娠檢測
        3.2.6 轉(zhuǎn)基因小羊PCR鑒定
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 山羊胎兒成纖維細(xì)胞的組織塊培養(yǎng)及克隆的形成
        3.3.2 豬瘟病毒E0基因在胎兒成纖維細(xì)胞中的PCR鑒定
        3.3.3 轉(zhuǎn)基因克隆胚胎的移植及檢測
        3.3.4 轉(zhuǎn)基因小羊PCR鑒定
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬瘟基因工程疫苗研究進(jìn)展[J]. 李群,顧秀萍,錢鐘,范娟,宋慶慶.  國外畜牧學(xué)(豬與禽). 2014(11)
[2]豬瘟疫苗的研究進(jìn)展及ST細(xì)胞苗的研究現(xiàn)狀[J]. 平玲,魏園園,王家敏,沈武玲,李倬,馬忠仁,喬自.  當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè). 2014(03)
[3]乳腺發(fā)育及泌乳相關(guān)miRNA研究進(jìn)展[J]. 金曉露,楊建香,李真,劉紅云,劉建新.  遺傳. 2013(06)
[4]豬瘟病毒Erns在桿狀病毒系統(tǒng)中的表達(dá)和純化[J]. 羅雪蓮,潘茲書.  氨基酸和生物資源. 2010(04)
[5]豬瘟病毒E2基因在Pichia pastoris中的表達(dá)及其免疫活性的初步研究[J]. 韓雪清,劉湘濤,張涌,謝慶閣,田波.  生物工程學(xué)報(bào). 2002(02)

博士論文
[1]人乳鐵蛋白基因定點(diǎn)敲入β乳球蛋白位點(diǎn)基因打靶奶山羊的研制[D]. 宋玉潔.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015
[2]TALEN介導(dǎo)的β-乳球蛋白基因敲除奶山羊的生產(chǎn)[D]. 崔趁趁.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3100859