先天性免疫是抵御和殺傷外界病原微生物入侵機(jī)體的第一道防線,在免疫反應(yīng)前期對(duì)機(jī)體的保護(hù)上起到重要的作用。Toll樣受體（Toll-like receptors,TLRs）作為一種介導(dǎo)先天免疫的重要功能性蛋白質(zhì),通過模式識(shí)別受體（Pattern recognition receptors,PRRs）直接作用于病原體,參與并調(diào)控特異性免疫應(yīng)答,在先天性免疫和特異性免疫中起到橋梁作用。鳥類廣泛分布于各地,其生存環(huán)境和食性均有著明顯的差異,因而接觸到病原微生物的種類和結(jié)構(gòu)也有所不同。本研究基于TLRs基因探討以下3個(gè)問題:1)鳥類TLRs基因家族的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系如何?2)鳥類TLR1和TLR2多拷貝基因的進(jìn)化模式出現(xiàn)了怎樣的差異?3)外界因素如何驅(qū)動(dòng)鳥類TLRs基因的進(jìn)化?本研究通過對(duì)綠尾虹雉、紅腹角雉、紅腹錦雞、藍(lán)孔雀、環(huán)頸雉和普通鵪鶉TLRs基因的克隆,并結(jié)合網(wǎng)上已有數(shù)據(jù),獲得主要結(jié)果如下:1)獲得6個(gè)物種TLR家族基因完整編碼區(qū)序列,其長(zhǎng)度從1959 bp（TLR1B）到3180 bp（TLR7）之間不等;10個(gè)基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性在雞形目中都比較保守,相似性均在90%以上;結(jié)合... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：141 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

TLRs信號(hào)通路圖，該圖引自[34]

7圖1.2脊椎動(dòng)物Toll樣基因系統(tǒng)發(fā)育[40]Fig1.2thephylogeneticofvertebrateToll-likereceptors[40]1.4鳥類Toll樣受體基因家族研究進(jìn)展鳥類和哺乳動(dòng)物分化時(shí)間大約在3億年前，雖然鳥類與哺乳動(dòng)物的免疫反應(yīng)大致相似，然而在淋巴組織、免疫細(xì)胞及抗體多樣性等方面都存在顯著差異。通過對(duì)紅原雞（GallusGallus）基因組序列的分析發(fā)現(xiàn)，雖然所有主要的細(xì)胞因子、趨化因子及整合素等基因家族成員均在雞基因組中被發(fā)現(xiàn)，但其家族成員的數(shù)量卻有所減少，特別是在多基因家族中[44]，尤其在MHC家族成員中，其數(shù)量與人類相比小了近20倍，因而也被稱作最低必需MHC[44]。同時(shí)在雞中也檢測(cè)到TLRs基因、哺乳動(dòng)物銜接蛋白的同源基因、參與TLRs基因下游信號(hào)傳導(dǎo)的激酶以及效應(yīng)分子等。在鳥類中共發(fā)現(xiàn)有10種TLRs基因，分別為TLR1A、TLR1B、TLR2A、TLR2B、TLR3、TLR4、TLR5、

262.4結(jié)果2.4.1基因組DNA提取本實(shí)驗(yàn)采用傳統(tǒng)酚/氯仿抽提法，對(duì)6個(gè)雞形目鳥類基因組DNA進(jìn)行提取，并經(jīng)凝膠電泳和ND-2000超微量核酸蛋白測(cè)定儀對(duì)基因組DNA的質(zhì)量和濃度進(jìn)行了檢測(cè)。如圖2.1所示，除了綠尾虹雉條帶較弱以外，其余5個(gè)均清晰明亮，說明基因組DNA提取的整體質(zhì)量和濃度均較高，可以滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求。圖2.1基因組DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果。M：DNAmarker（DL2000），Lolh：綠尾虹雉，Trte：紅腹角雉，Chpi：紅腹錦雞，Coco：普通鵪鶉，Phco：環(huán)頸雉，Paus：藍(lán)孔雀Fig2.1TheagarosegelelectrophoresisresultsofgenomicDNA.M：DNAmarker（DL2000），Lolh:L.lhuysii,Trte:T.temminckii,Chpi:C.pictus,Coco:C.coturnix,Phco:P.colchicus,Paus:P.cristatus2.4.2部分PCR擴(kuò)增與測(cè)序結(jié)果通過設(shè)計(jì)特異性引物，以前面檢驗(yàn)合格的基因組DNA為模板，采用PCR擴(kuò)增技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行體外擴(kuò)增。由于引物較多，因而PCR擴(kuò)增圖片也較多，由于篇幅有限，不能一一列出，因此選取部分?jǐn)U增和測(cè)序結(jié)果為代表（圖2.2）。2.4.3雞形目鳥類TLRs基因序列特征分析通過將擴(kuò)增的高質(zhì)量的PCR產(chǎn)物送往北京擎科梓熙生物技術(shù)（成都）有限公司和生物工程（成都）有限公司進(jìn)行雙向測(cè)序，從公司返回的測(cè)序峰圖顯示，測(cè)序峰圖單一、清晰沒有套峰、亂峰，說明測(cè)序結(jié)果可用。由于鳥類TLRs基因編碼區(qū)序列普

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]偶蹄目TLR1-4基因的分子進(jìn)化研究[D]. 顧棚.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3100115