杜仲（Eucommia ulmoides Oliver）屬于杜仲科杜仲屬,為第三紀(jì)孑遺物種,其葉和樹皮均可入藥,是我國特有的傳統(tǒng)中藥材。杜仲富含多種藥用功能成分。此外,杜仲還是重要的膠源植物。Dirigent蛋白不僅在植物次生代謝產(chǎn)物合成過程中發(fā)揮重要作用,還參與植物抗逆性。研究杜仲Dirigent基因可為杜仲的開發(fā)利用提供理論參考。本研究在本實驗室前期構(gòu)建杜仲基因組和轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫基礎(chǔ)上,克隆了一個杜仲Dirigent蛋白編碼基因并定名為EuDIR3,對其進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化和表達(dá)分析研究。取得以下研究結(jié)果:1、EuDIR3基因克隆及序列分析以杜仲嫩葉為材料,提取其RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA,以此為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,克隆得到杜仲Dirigent編碼基因（EuDIR3）。該序列長351 bp,不含內(nèi)含子,編碼116個氨基酸;分析表明EuDIR3與咖啡、菠蘿和蓖麻等同源性較高;系統(tǒng)發(fā)育樹分析則表明EuDIR3基因與黃胡蘿卜和菠蘿等親緣關(guān)系更接近,與梅花和櫻花較遠(yuǎn);該基因編碼的Dirigent蛋白分子量為11.84 kD,理論等電點(diǎn)為4.66,屬于不穩(wěn)定疏水性蛋白;在細(xì)胞質(zhì)、線粒體和細(xì)胞核中均有分布... 

【文章來源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

杜仲中木脂素的母核結(jié)構(gòu)

3)、大腸桿菌(E. coli)菌株DH5α、農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株LBA4404由貴州大學(xué)農(nóng)業(yè)生物工程研究院保存。圖 2 pET-28a-NAD1 載體圖Fig.2 Diagram of pET-28a-NAD1 vector1pET-28a-NAD15665bpf1 oriKanRoribomroplacIlacI promoterT7 promoterNAD1EcoRINotI

貴州大學(xué) 2019 屆 碩士研究生學(xué)位論文第三章 結(jié)果與分析基因克隆與生物信息學(xué)分析 RNA 提取及 EuDIR3 基因擴(kuò)增光光度計及 1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果顯示所提取的杜仲.8-2.2 之間，28S 帶較 18S 帶更亮更寬，說明 RNA 無蛋白質(zhì)、D高，且提取質(zhì)量佳，沒有降解，可用于后續(xù)試驗。得到的杜仲嫩葉 cDNA 為模板，利用設(shè)計好的引物(F-1/R-1)，進(jìn) PCR 擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng) 1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果顯示獲得片段。杜仲總 RNA 提取及 EuDIR3 基因擴(kuò)增見圖 4。


本文編號：3096642