試驗(yàn)旨在利用CRISPR/Cas9技術(shù)分別在雞成纖維細(xì)胞DF-1和雞胚胎干細(xì)胞（Em-bryomic stem cell,ESCs）上介導(dǎo)CPED1基因敲除,以期為后續(xù)研究CPED1基因功能提供技術(shù)依據(jù)。克隆CPED1基因全長(zhǎng);構(gòu)建cas9/g RNA載體并轉(zhuǎn)染DF-1和ESCs,經(jīng)流式分選陽(yáng)性細(xì)胞,采用T7E1酶切法選擇活性最佳的敲除載體并分析其敲除效率;同時(shí),對(duì)DF-1中的脫靶效率進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果成功克隆雞CPED1基因,并構(gòu)建3個(gè)cas9/g RNA載體;T7E1酶切結(jié)果表明cas9/g RNA1載體在DF-1陽(yáng)性細(xì)胞中的敲除活性（37%）最佳,該載體也可定點(diǎn)敲除ESCs中的CPED1基因,敲除活性為25%,且在DF-1細(xì)胞中未發(fā)生脫靶。表明CRISPR/Cas9可有效介導(dǎo)雞CPED1基因在DF-1和ESCs上敲除。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)家禽. 2017,39(07)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要材料
    1.2 CPED1基因克隆與靶位點(diǎn)設(shè)計(jì)
    1.3 gRNA重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.4 DF-1細(xì)胞及ESCs的培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染
    1.5 T7E1酶切檢測(cè)
    1.6 Cas9/gRNA敲除載體脫靶效率檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 CPED1基因克隆與Cas9/gRNA表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.2 靶向CPED1基因的Cas9/gRNA活性檢測(cè)
    2.3 脫靶效率檢測(cè)
3 討論
4 結(jié)論



本文編號(hào)：3095046