目的構(gòu)建腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因LASS2/TMSG1全長及其截短體質(zhì)粒,探討其對人前列腺癌細(xì)胞生長、遷移、侵襲等生物學(xué)功能的影響。方法構(gòu)建LASS2/TMSG1基因全長以及3個(gè)截短體的慢病毒質(zhì)粒（pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro）,并將其穩(wěn)定轉(zhuǎn)染到人前列腺癌細(xì)胞系PC-3M-1E8中,采用Western blot法鑒定穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的效果;然后采用軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕修復(fù)試驗(yàn)、Transwell體外侵襲實(shí)驗(yàn)等分析LASS2/TMSG1基因全長以及3個(gè)截短體對人前列腺癌細(xì)胞系PC-3M-1E8生物學(xué)功能的影響。結(jié)果 LASS2/TMSG1蛋白和缺失Homeobox（Hox）結(jié)構(gòu)域的截短蛋白,可以有效抑制PC-3M-1E8細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力（P均<0.001）;缺失TLC結(jié)構(gòu)域的LASS2/TMSG1蛋白則喪失抑制前列腺癌細(xì)胞生長的功能。結(jié)論 LASS2/TMSG1蛋白的TLC結(jié)構(gòu)域是抑制前列腺癌細(xì)胞生長的關(guān)鍵功能域。 

【文章來源】：臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志. 2020,36(07)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

LASS2基因全長以及3個(gè)截短體序列示意圖

以LASS2/TMSG1-pcDNA3.0質(zhì)粒為模板,采用非依賴DNA連接酶的連接方法構(gòu)建慢病毒質(zhì)粒系統(tǒng),其中,T1截短體全長972 bp,T2截短體全長534 bp,T3截短體全長1 114 bp,LASS2全長1 143 bp(圖2A)。隨后,采用慢病毒感染人前列腺癌高轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞系PC-3M-1E8(LASS2/TMSG1低表達(dá)),并利用慢病毒質(zhì)粒系統(tǒng)所帶有的嘌呤霉素抗性基因進(jìn)行篩選,得到穩(wěn)定細(xì)胞系后再采用Western blot法進(jìn)行檢測,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,LASS2/TMSG1全長蛋白分子質(zhì)量在(4.0～5.0)×104之間(實(shí)際分子質(zhì)量為4.5×104),T1截短體蛋白分子質(zhì)量在(3.5～4.0)×104之間,T2截短體蛋白分子質(zhì)量在(1.5～2.5)×104之間,T3截短體蛋白分子質(zhì)量在(4.0～5.0)×104之間(圖2B)。與預(yù)測的分子質(zhì)量相符合:T1截短體蛋白分子質(zhì)量35.64×103,T2截短體蛋白分子質(zhì)量19.58×103,T3截短體蛋白分子質(zhì)量40.85×103。2.2 人前列腺癌細(xì)胞系PC-3M-1E8中LASS2基因全長以及3個(gè)截短體蛋白的分布

本組構(gòu)建的T2截短體就特異性的刪除了LASS2基因的TLC結(jié)構(gòu)域。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,T2截短體對人前列腺癌細(xì)胞系PC-3M-1E8細(xì)胞的影響具有雙重性。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了LASS2基因T2截短體序列的人前列腺癌細(xì)胞系PC-3M-1E8細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲均受顯著抑制(P均<0.001),在細(xì)胞凋亡方面以及非錨定依賴性生長方面并無明顯改變,但在錨定依賴性生長(P<0.001)方面卻顯著增強(qiáng)。其中涉及的具體機(jī)制可能并不只限于神經(jīng)酰胺所參與的信號通路,具體機(jī)制還有待分析。圖4 A.軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)檢測各穩(wěn)定細(xì)胞系非錨定依賴性生長能力;B.在軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)中各穩(wěn)定細(xì)胞系形成的克隆數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果;C.在軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)中各穩(wěn)定細(xì)胞系形成的克隆直徑統(tǒng)計(jì)結(jié)果;

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因1轉(zhuǎn)染對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231體外生物學(xué)行為的影響[J]. 蘇靜,由江峰,王潔良,崔湘琳,方偉崗,鄭杰.  中華病理學(xué)雜志. 2007(10)
[2]人腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因TMSG-1單克隆抗體的制備、鑒定及在腫瘤檢測中的應(yīng)用[J]. 裴斐,由江峰,寧鈞宇,楊京平,王玉萍,韓志惠,王潔良,崔湘霖,楊邵敏,鄭杰.  中華病理學(xué)雜志. 2005(01)
[3]應(yīng)用mRNA差異顯示技術(shù)克隆腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因TMSG-1[J]. 馬春樹,劉宇欣,鄭杰,方偉剛,由江峰,王潔良,崔湘琳,吳秉銓.  中國科學(xué)（C輯:生命科學(xué)）. 2002(03)
[4]具有不同轉(zhuǎn)移潛能的前列腺癌細(xì)胞亞系的分離鑒定[J]. 劉宇欣,鄭杰,方偉崗,由江峰,王潔良,崔湘林,吳秉銓.  中華病理學(xué)雜志. 1999(05)



本文編號：3093895