黑曲霉是重要的細(xì)胞工廠之一,廣泛用于工業(yè)上各類酶制劑和有機(jī)酸的生產(chǎn)。以淀粉為原料的加工過程中,利用α-葡萄糖苷酶的轉(zhuǎn)糖苷作用能生成低聚異麥芽糖。黑曲霉產(chǎn)α-葡萄糖苷酶時(shí)往往伴隨著糖化酶而抑制其轉(zhuǎn)苷能力,其代謝機(jī)制不明確。在本研究中,我們首先通過分子遺傳手段構(gòu)建糖化酶基因galA缺失的黑曲霉突變株,獲得了α-葡萄糖苷酶活升高的菌株;其次在代謝組水平和轉(zhuǎn)錄組水平分析基因缺失導(dǎo)致的差異代謝物及轉(zhuǎn)錄本,構(gòu)建差異代謝通路以確認(rèn)黑曲霉產(chǎn)α-葡萄糖苷酶與糖化酶過程中關(guān)鍵因素;最后使用篩選到的關(guān)鍵代謝物進(jìn)行添加培養(yǎng),以驗(yàn)證本方法的有效性。首先利用已構(gòu)建好的敲除表達(dá)盒g(shù)alA1-N^R、N^R-galA2重新轉(zhuǎn)化黑曲霉出發(fā)株HE01的原生質(zhì)體,獲得糖化酶基因缺失的△galA后,測定α-葡萄糖苷酶活和糖化酶活隨時(shí)間的變化曲線,確定黑曲霉HE01和△galA代謝組和轉(zhuǎn)錄組分析的最適時(shí)期:在產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)第168 h,兩菌株的兩種酶活均表現(xiàn)最高。其次選擇最適時(shí)期的黑曲霉菌體快速冷凍一部分做代謝物制備,另一部分做RNA提取。一部分菌體采用真空冷凍干燥后甲醇水溶液進(jìn)行少量多次... 

【文章來源】：深圳大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

淀粉加工過程

2.1 galA1-NR和 NR-galA2 片段的質(zhì)粒 bp maker 1：galA1-NR片段的質(zhì)粒 2 bands of 1% agarose gel with plasmid in plasmid including galA1-NR2: plasmid 敲除表達(dá)盒隨機(jī)挑取 5 個(gè)進(jìn)行菌落 PCR，以alA-MkF、galA-4R 擴(kuò)增 NR-galA行過夜搖菌進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或保種

圖 2.1 galA1-NR和 NR-galA2 片段的質(zhì)粒提取00 bp maker 1：galA1-NR片段的質(zhì)粒 2 ：NR-galA2tic bands of 1% agarose gel with plasmid including galA 1: plasmid including galA1-NR2: plasmid including gaalA 敲除表達(dá)盒落隨機(jī)挑取 5 個(gè)進(jìn)行菌落 PCR，以引物 galA galA-MkF、galA-4R 擴(kuò)增 NR-galA2 序列，結(jié)進(jìn)行過夜搖菌進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或保種。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黑曲霉SH-2基因組中注釋的7個(gè)α-葡萄糖苷酶基因的鑒定與表達(dá)分析[J]. 楊海燕,潘力,王斌.  現(xiàn)代食品科技. 2017(06)
[2]頂頭孢霉中己糖激酶編碼基因Achka的功能研究[J]. 蘇豫,陳依軍,車永勝,劉鋼.  菌物學(xué)報(bào). 2017(03)
[3]生淀粉結(jié)合域SBD及糖化酶基因在畢赤酵母中的融合表達(dá)[J]. 朱婧,劉海余,王青艷,米慧芝,朱綺霞,廖思明,秦艷,申乃坤,黃日波.  廣西科學(xué). 2016(01)
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碩士論文
[1]黑曲霉產(chǎn)糖化酶合成培養(yǎng)基優(yōu)化及代謝輪廓分析方法的初步探索[D]. 陳香粉.華東理工大學(xué) 2014
[2]黑曲霉糖化酶基因在酵母中克隆和表達(dá)[D]. 錢鵬.安徽工程大學(xué) 2012
[3]真菌代謝產(chǎn)物中促進(jìn)納他霉素合成的誘導(dǎo)子的研究[D]. 史強(qiáng).江南大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3093054