發(fā)布時(shí)間：2021-03-18 21:27

　　目的:構(gòu)建介導(dǎo)小鼠肝癌相關(guān)抗原SMP30基因的慢病毒重組子,探討SMP30在基因水平致敏DC有效性及其誘生CTL體外抗HCC的作用。方法:（1）運(yùn)用基因重組技術(shù),將小鼠SMP30基因連接到帶綠色熒光蛋白（GFP）的慢病毒表達(dá)載體LV5中,構(gòu)建SMP30慢病毒重組子并轉(zhuǎn)染小鼠DC,實(shí)驗(yàn)分為慢病毒空載體組（LV-control組）、SMP30慢病毒組（LV-SMP30組）、SMP30蛋白組（SMP30 Protein組）和空白對(duì)照DC組（DC組）,通過Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染組SMP30的表達(dá)。（2）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)致敏后DC的表面分子在各組間的差異,判斷SMP30慢病毒重組子對(duì)DC成熟的影響。（3）ELISA檢測(cè)致敏后各組DC上清液中IL-12和IFN-γ的分泌量。（4）CD8+T細(xì)胞磁珠分選試劑盒從BALB/C小鼠脾臟的單細(xì)胞懸液中分選CD8+T細(xì)胞,然后通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD8+T細(xì)胞純度,再和上述各組DC細(xì)胞共孵育誘生CTL,用ELISA檢測(cè)各組CTL上清液中IL-2、IFN-γ的分泌量。（5）將誘生的CTL與小鼠H22肝癌細(xì)胞共孵育,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組CTL對(duì)肝癌細(xì)胞的殺傷... 

【文章來(lái)源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：94 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

慢病毒滴度測(cè)定結(jié)果

C D圖 2：兩組慢病毒轉(zhuǎn)染 DC 細(xì)胞后綠色熒光蛋白表達(dá)( 2. Expression of green fluorescent protein in DC celentivirus in two groups (×200).trol 組（LM）; B:LV-control 組（FLM）; C:LV-SMP30 組（LMern Blot 檢測(cè) SMP30 蛋白的表達(dá)P30 組和 LV-control 的 Western Blot 檢測(cè)結(jié)均可在 36kD（GAPDH）和 33kD（SMP30）處胞的 GAPDH 內(nèi)參條帶基本相同。通過與 LV組條帶更加明顯，說明 LV-SMP30 組轉(zhuǎn)染的 D

C D圖 2：兩組慢病毒轉(zhuǎn)染 DC 細(xì)胞后綠色熒光蛋白表達(dá)(×200) 2. Expression of green fluorescent protein in DC cells translentivirus in two groups (×200).trol 組（LM）; B:LV-control 組（FLM）; C:LV-SMP30 組（LM）; D:LV-ern Blot 檢測(cè) SMP30 蛋白的表達(dá)P30 組和 LV-control 的 Western Blot 檢測(cè)結(jié)果（圖 均可在 36kD（GAPDH）和 33kD（SMP30）處出現(xiàn)陽(yáng)性胞的 GAPDH 內(nèi)參條帶基本相同。通過與 LV-contro組條帶更加明顯，說明 LV-SMP30 組轉(zhuǎn)染的 DC 細(xì)胞表

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3088955