發(fā)布時(shí)間：2021-03-17 20:37

　　為了掌握青海省4種食源性動(dòng)物體內(nèi)志賀菌的分布情況,針對(duì)志賀菌屬侵襲性質(zhì)粒抗原H基因（invasive plasmid,ipaH）設(shè)計(jì)1對(duì)特異性引物,建立志賀菌的PCR檢測(cè)方法,優(yōu)化反應(yīng)體系,檢測(cè)該方法的敏感性和特異性,并將該方法應(yīng)用于臨床樣本檢測(cè)。結(jié)果表明,建立的PCR方法能特異性擴(kuò)增志賀菌ipaH基因,而沙門氏菌、大腸桿菌、葡萄球菌、枯草桿菌、變形桿菌等均未擴(kuò)增出條帶;最低檢測(cè)限值為1.8 pg/μL。在臨床樣本檢測(cè)中,100株疑似菌株的陽性率為62.00%,其中牦牛源75.00%（3/4）,雞源35.29%（12/34）,羊源44.44%（8/18）,豬源88.64%（39/44）;新鮮雞糞和羊糞的陽性率分別為91.67%（11/12）和90.91%（10/11）。這說明試驗(yàn)所建立的PCR方法具有良好的敏感性和特異性,可應(yīng)用于志賀菌的實(shí)驗(yàn)室診斷;4種動(dòng)物體內(nèi)均不同程度帶菌,在臨床診斷和治療時(shí)不可忽視該菌的致病作用。 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,48(21)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

特異性試驗(yàn)結(jié)果

用核酸測(cè)定儀測(cè)得DNA模板濃度為180 ng/μL,對(duì)不同稀釋度的模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,當(dāng)模板濃度達(dá)到1.8 pg/μL時(shí)可擴(kuò)增出相應(yīng)條帶,由此可見該P(yáng)CR檢測(cè)方法最低可檢出1.8 pg/μL的志賀菌DNA(圖4)。2.4 臨床樣本檢測(cè)

運(yùn)用建立的PCR方法對(duì)100株疑似菌株進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)62株菌擴(kuò)增出目的條帶,檢出率為62.00%。不同動(dòng)物的檢出率各不相同,牦牛源為75.00%(3/4),雞源為35.29%(12/34),羊源為44.44%(8/18),豬源為88.64%(39/44),且豬源帶菌率明顯高于其他3種動(dòng)物。對(duì)擴(kuò)增陽性菌株進(jìn)行測(cè)序,測(cè)序結(jié)果與鮑氏志賀菌(登錄號(hào)CP026865.1)同源性達(dá)到96.81%、與痢疾志賀菌(登錄號(hào)CP02678.1)同源性達(dá)到97.35%、與宋內(nèi)氏志賀菌(登錄號(hào)CP037997.1)同源性達(dá)到95.22%、與福氏志賀菌(登錄號(hào)CP037996.1)同源性達(dá)到95.22%,證實(shí)該試驗(yàn)檢出的陽性菌株為志賀菌(圖 5～8)。2.4.2 糞樣樣本中志賀菌的PCR檢測(cè)。

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號(hào)：3087683