【目的】在乳酸乳球菌NZ9000中異源表達(dá)德氏乳桿菌保加利亞亞種中由雙組分系統(tǒng)TCS1（JN675228/JN675229）調(diào)控的與酸適應(yīng)相關(guān)基因,進(jìn)而探究德氏乳桿菌保加利亞亞種應(yīng)對酸脅迫的機(jī)制。【方法】通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳驗(yàn)證由德氏乳桿菌保加利亞亞種TCS1調(diào)控的與酸適應(yīng)相關(guān)基因中腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（aprt）、D-丙氨酸-D-丙氨酸連接酶（ddl）、寡肽ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（oppDII）和延伸因子Ts（tsf）在乳酸乳球菌NZ9000中的表達(dá)情況。酸處理實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證基因表達(dá)對宿主菌酸脅迫耐受能力的影響。并采用酵母雙雜交驗(yàn)證雙組分系統(tǒng)TCS1與表達(dá)的酸適應(yīng)相關(guān)基因之間的互作關(guān)系及具體的互作部位。【結(jié)果】結(jié)果表明,乳酸乳球菌NZ9000中成功表達(dá)了aprt、ddl、oppDII和tsf。aprt、ddl基因使重組菌對酸脅迫的抗性分別提高了75倍和114倍。oppDII和tsf基因的表達(dá)對重組菌株的耐酸能力沒有明顯影響。酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)表明TCS1中的組氨酸蛋白激酶HPK1與Ddl之間存在相互作用,且HPK1-C結(jié)構(gòu)域是二者相互作用的關(guān)鍵區(qū)域�！窘Y(jié)論】ap... 

【文章來源】：微生物學(xué)報. 2020,60(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：17 頁

【部分圖文】：

表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建

重組質(zhì)粒酶切驗(yàn)證電泳圖

耐酸調(diào)控相關(guān)基因RT-PCR產(chǎn)物的電泳圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]棘孢曲霉β-葡萄糖苷酶的乳酸乳球菌表達(dá)[J]. 黃建飛,成麗麗,李娜,司麗芳,羅立新.  現(xiàn)代食品科技. 2014(05)

博士論文
[1]德氏乳桿菌保加利亞亞種CAUH1酸耐受機(jī)制的蛋白組學(xué)研究及抗酸脅迫基因Ldb0677和pyk的功能分析[D]. 翟征遠(yuǎn).中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



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