目的:構(gòu)建FUT2基因過(guò)表達(dá)慢病毒載體,并使用此載體轉(zhuǎn)染胰腺癌PaCa-2細(xì)胞,構(gòu)建FUT2基因過(guò)表達(dá)的PaCa-2細(xì)胞,初步探索FUT2基因過(guò)表達(dá)對(duì)胰腺癌PaCa-2細(xì)胞功能的影響,并為今后進(jìn)一步研究FUT2的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法:（1）FUT2基因慢病毒載體的構(gòu)建:PCR擴(kuò)增FUT2基因,電泳鑒定正確后與慢病毒載體連接,將構(gòu)建好的FUT2慢病毒載體進(jìn)行轉(zhuǎn)化并通過(guò)電泳和基因測(cè)序進(jìn)行鑒定;使用正確的FUT2慢病毒載體和混合質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,將產(chǎn)生的病毒顆粒過(guò)濾和濃縮,之后進(jìn)行質(zhì)檢。（2）FUT2基因過(guò)表達(dá)胰腺癌PaCa-2細(xì)胞構(gòu)建:使用先前構(gòu)建的病毒顆粒感染胰腺癌PaCa-2細(xì)胞,使用藥物篩選FUT2過(guò)表達(dá)胰腺癌PaCa-2細(xì)胞株;利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western Blot方法檢測(cè)慢病毒后胰腺癌PaCa-2細(xì)胞中FUT2基因在mRNA水平與蛋白水平上的表達(dá)變化。（3）功能試驗(yàn):通過(guò)CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、Trans-well侵襲實(shí)驗(yàn)、劃痕試驗(yàn)、流式細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)FUT2基因過(guò)表達(dá)對(duì)胰腺癌PaCa-2細(xì)胞增殖、遷移、轉(zhuǎn)移能力及凋亡情況的影響。結(jié)果:經(jīng)電泳實(shí)驗(yàn)和基因測(cè)序鑒定... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．病毒載體構(gòu)建流程圖??２．ＰＣＲ擴(kuò)增目的基因片段??根據(jù)ＧｅｎＢａｎｋ中人類ＦＵＴ２基因序列（ＮＭ－０００５１１），設(shè)計(jì)ｆ分別含ＦＵＴ２基??因ＣＤＳ區(qū)５？端及３’端部分序列的一對(duì)引物，用于ＰＣＲ釣�。疲眨裕不�

圖２載體圖譜??

圖３．?ｐＨｅｌｐｅｒ?１．０質(zhì)粒圖譜（Ａ）和ｐＨｅｌｐｅｒ?２．０質(zhì)粒圖譜（Ｂ）??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]細(xì)胞表面糖鏈末端唾液酸和巖藻糖與某些細(xì)胞生物學(xué)行為的關(guān)系[J]. 張英,張夏英,劉飛,齊慧玲,陳惠黎.  實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào). 2002(04)



本文編號(hào)：3082414