目的:在細胞水平研究ARK5與胃癌多藥耐藥的關(guān)系,明確沉默ARK5基因能否有效逆轉(zhuǎn)胃癌多藥耐藥細胞SGC7901/DDP的耐藥性。方法:1.設計針對ARK5基因的RNA干擾（RNA interference,RNAi）序列及陰性對照（negative control,NC）序列,并已完成對LV-ARK5-RNAi重組慢病毒載體和陰性重組慢病毒載體的構(gòu)建;2.用帶熒光（GFP）的陰性重組慢病毒載體感染SGC7901/DDP細胞,通過在熒光倒置顯微鏡下觀察來挑選出最優(yōu)的感染條件;3.采用Western Blot技術(shù)測定ARK5在SGC7901細胞和順鉑（DDP）誘導的SGC7901/DDP細胞中的蛋白表達量,并驗證構(gòu)建的慢病毒對ARK5靶點的干擾效率;4.用順鉑（DDP）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）、多西他賽（DR）、阿霉素（ADR）四種結(jié)構(gòu)和機制各異的抗腫瘤藥物分別處理SGC7901、SGC7901/DDP、ARK5慢病毒感染組細胞SGC7901/DDP-shARK5、陰性病毒感染組SGC7901/DDPNC,經(jīng)CCK8、克隆形成實驗、流式細胞儀的檢測其變化,觀察沉默ARK5基因?qū)GC7... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮寫、全稱及中文對照
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實驗主要材料
        2.1.1 細胞株和重組慢病毒
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要試驗用液的配置
        2.1.4 主要實驗儀器和設備
    2.2 實驗方法與步驟
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 重組慢病毒感染SGC7901/DDP預實驗
        2.2.3 Western blot測定ARK5 蛋白表達的情況
        2.2.4 CCK比色法檢測細胞存活率
        2.2.5 化療藥物的IC50 實驗
        2.2.6細胞內(nèi)阿霉素的蓄積和滁留實驗
        2.2.7平板細胞克隆形成實驗
        2.2.8 細胞凋亡檢測
    2.3 數(shù)據(jù)處理
第3章 結(jié)果
    3.1 ARK5 在胃癌親本細胞SGC7901 與胃癌多藥耐藥細胞SGC7901/DDP中蛋白的表達
    3.2 ARK5 重組慢病毒轉(zhuǎn)染SGC7901/DDP細胞的條件
    3.3 ARK5 蛋白的RNA干擾效率
    3.4 干擾ARK5 的蛋白表達對胃癌細胞在不同抗腫瘤藥物作用下存活率的影響
    3.5 干擾ARK5 蛋白的表達對化療藥物IC50 的影響
    3.6 干擾ARK5 的蛋白表達對胃癌細胞克隆形成能力的影響
    3.7 干擾ARK5 的蛋白表達對胃癌細胞凋亡的影響
    3.8 干擾ARK5 蛋白的表達對胃癌細胞中阿霉素的泵出率的影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻
綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]胃癌多藥耐藥機制及研究進展[J]. 黃昊,楊星九,高苒.  中國醫(yī)學科學院學報. 2016(06)
[2]Overcoming drug efflux-based multidrug resistance in cancer with nanotechnology[J]. Xue Xue and Xing-Jie Liang CAS Key Laboratory for Biomedical Effects of Nanomaterials and Nanosafety,National Center for Nanoscience and Technology of China,Beijing 100190,P.R.China..  癌癥. 2012(02)

碩士論文
[1]KLF8在缺氧誘導胃癌細胞多藥耐藥中的作用及機制研究[D]. 張慧.第四軍醫(yī)大學 2013



本文編號：3078222