目的:探討Tweety家族成員1（tweety-homolog 1,TTYH1）基因在正常肺組織細(xì)胞株16HBE和高骨轉(zhuǎn)移性人肺腺癌細(xì)胞株SPC-A-1BM中的基因表達(dá)情況;并進(jìn)一步探究沉默TTYH1基因?qū)Ψ伟┘?xì)胞株SPC-A-1BM的侵襲能力及其對基質(zhì)金屬蛋白酶9（Matrix metalloproteinases 9,MMP9）表達(dá)的影響。方法:本實驗首先通過實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（Quantitative Real-time reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR）技術(shù)檢測TTYH1基因在肺癌SPC-A-1BM細(xì)胞和正常肺組織16HBE細(xì)胞中的表達(dá)情況,分析兩種細(xì)胞中TTYH1表達(dá)水平是否存在差異。其次通過RNA干擾（RNA interference,RNAi）技術(shù)合成小干擾RNA序列（siRNA）靶向沉默TTYH1基因。實驗共分為3組:1組為空白對照組（無siRNA干擾組,non-siRNA組）,2組為陰性對照組（TTYH1非特異性siRNA陰性對照干擾組,siRNA-NC組）,3組為實驗組（TTY... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

HBE細(xì)胞株和SPC-A-1BM細(xì)胞株中TTYH1mRNA表達(dá)情況

圖2 FAM標(biāo)記的siRNA轉(zhuǎn)染SPC-A-1BM細(xì)胞72小時（20×）A 沉默 TTYH1 基因下調(diào)肺癌 SPC-A-1BM 細(xì)胞 TTYH1、MM 表達(dá)實驗已證實，TTYH1在肺癌SPC-A-1BM細(xì)胞株中的表達(dá)明顯高于正常E細(xì)胞株。設(shè)置空白對照組、陰性對照組及實驗組肺腺癌SPC-A-1BM細(xì)量的PBS、siRNA-NC及siRNA-TTYH1轉(zhuǎn)染后72h，應(yīng)用qRT-PCR對 mRNA及MMP9 mRNA表達(dá)量進(jìn)行檢測，同樣根據(jù)各組所得的Ct值作為內(nèi)參，應(yīng)用2-△△Ct法進(jìn)行三組間TTYH1 mRNA及MMP9 mRNA的相較。以空白對照組的TTYH1 mRNA相對表達(dá)量為參考值（即non-siRN mRNA的相對表達(dá)量的變化倍率F=1），實驗組及陰性對照組的TT對表達(dá)量的變化倍率分別為0.35±0.02、0.98±0.02，抑制率分別為65%、NA-TTYH1顯著抑制了TTYH1 mRNA的表達(dá)（P<0.01），而陰性對照組

陰性對照組相比較的統(tǒng)計學(xué)差異A B圖3 沉默TTYH1基因?qū)PC-A-1BM細(xì)胞TTYH1 mRNA、MMP9 mRNA表達(dá)水平的影響4 siRNA 沉默 TTYH1 基因下調(diào) SPC-A-1BM 細(xì)胞 TTYH1、MMP9 蛋白表達(dá)上述實驗證明，siRNA沉默TTYH1基因后TTYH1 mRNA表達(dá)下調(diào)，并可下調(diào)


本文編號：3073747