細(xì)胞增殖的過程是高度嚴(yán)謹(jǐn)和復(fù)雜的,受到細(xì)胞內(nèi)外多種因素的調(diào)控。CCAR1（Cell-Cycle and Apoptosis Regulator 1）基因是新發(fā)現(xiàn)的一類轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,屬于細(xì)胞核周磷酸蛋白,該基因與細(xì)胞增殖密切相關(guān)。在本研究中,采用分段擴(kuò)增的方法克隆CCAR1基因的CDS區(qū)序列,并進(jìn)行生物信息學(xué)分析;分離培養(yǎng)了豬肌源性前體脂肪細(xì)胞,在PK15細(xì)胞和豬肌源性前體脂肪細(xì)胞中研究了CCAR1基因的亞細(xì)胞定位,探究CCAR1的表達(dá)情況;使用qRT-PCR技術(shù)檢測CCAR1基因在馬身豬和大白豬的8個組織,包括心臟、肝臟、皮下脂肪、脾臟、腎臟、小腸、小腦和肌肉中的表達(dá)譜,以及在0、3、6月齡的腰大肌、背最長肌和股二頭肌中的表達(dá),目的是了解CCAR1基因的表達(dá)規(guī)律;成功構(gòu)建了CCAR1基因的CRISPR/Cas9敲除載體,將重組載體轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞和PK15細(xì)胞觀察轉(zhuǎn)染效率,并進(jìn)行qRT-PCR、Western Blotting以及CCK8（cell counting kit 8）檢測,檢測CCAR1基因mRNA和蛋白的表達(dá)情況以及與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)量,為研究CCAR1基因的功能... 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

CCAR1基因的克隆

-16-圖2-2CCAR1基因核苷酸序列與預(yù)測氨基酸序列Fig.2-2NucleotideanddeducedaminoacidsequenceofCCAR1gene2.1.2CCAR1生物信息學(xué)分析NCBI在線軟件預(yù)測CCAR1蛋白的保守結(jié)構(gòu)域共有5個，分別為S1-Like結(jié)構(gòu)域、SPORsuper結(jié)構(gòu)域、DBC1結(jié)構(gòu)域、SAP結(jié)構(gòu)域以及SMC-Nsuper結(jié)構(gòu)域（圖2-3）。CCAR1蛋白共包含1152個氨基酸，分子量約為131.9kDa，等電點(diǎn)為5.57。跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測發(fā)現(xiàn)跨膜區(qū)transmbrane在outside的上方，未跨過inside和outside，因此該蛋白不屬于跨膜蛋白（圖2-4）。磷酸化位點(diǎn)結(jié)構(gòu)表明，CCAR1蛋白存在絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸共三個磷酸化位點(diǎn)，發(fā)生在三個位置上磷酸化修飾的氨基酸殘基的數(shù)量分別為19、13和7（圖2-5）。亞細(xì)胞定位結(jié)果表明82.6%定位于細(xì)胞核，8.7%定位于細(xì)胞質(zhì)膜，8.7%定位于細(xì)胞骨架。CCAR1核苷酸序列與人類、小鼠、綿羊、野牛、雙峰駱駝、小矛鯨以及抹香鯨的同源性分別為93.89%、91.05%、94.88%、94.80%、95.98%、95.85%和

CCAR1跨膜預(yù)測結(jié)果


本文編號：3070102