刺參（Apositichopus japonicus）屬于棘皮動(dòng)物門海參綱,是我國黃渤海地區(qū)重要的養(yǎng)殖品種之一。近年來,由于海洋環(huán)境的日益惡化,刺參極易受到細(xì)菌、病毒等病原微生物的感染,導(dǎo)致腐皮綜合征、腫嘴病等疫病頻發(fā),給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,嚴(yán)重制約了刺參養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。刺參缺乏適應(yīng)性免疫系統(tǒng),完全依賴固有免疫系統(tǒng)抵御病原侵染。因此,開展刺參固有免疫相關(guān)基因及其免疫功能的研究,對(duì)豐富和發(fā)展海洋無脊椎動(dòng)物免疫學(xué)理論研究,保障刺參養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展意義重大。本研究利用分子生物學(xué)、生物信息學(xué)、免疫學(xué)等技術(shù),以棘皮動(dòng)物刺參（Apositichopus japonicus）為實(shí)驗(yàn)材料,開展了巖藻糖凝集素（AjFucolectin-1）和半胱氨酸蛋白酶抑制劑（AjCystain）基因的研究。克隆得到AjFL-1的開放閱讀框（Open reading frame）,長度為546 bp,編碼181個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)分子量為20 kDa。經(jīng)BLAST序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)Aj FL-1與其他物種中的巖藻糖凝集素相似度在30%-40%之間。利用SMART進(jìn)行結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)分析后發(fā)現(xiàn)AjFL-1由一個(gè)典型的巖藻... 

【文章來源】：大連海洋大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

AjFL-1的cDNA序列及翻譯的氨基酸序列

圖 3-2 刺參凝集素 AjFL-1 氨基酸的多序列比對(duì)注：黑色陰影被覆蓋部分是氨基酸序列的相似度在 60％以上，保守性基序 h2DGx 用藍(lán)色框標(biāo)記，巖藻糖結(jié)合基序 HX26RXDX4[R/K]用紅色框標(biāo)記。Fig. 3-2 Multiple alignment of the CRD of AjFL-1 from A. japonicus (KY807069) with those of other F-typelectins including pentraxin from Xenopus tropicalis (P49263), fucolectin-like from Salmo salar(XP014056169.1), fucolectin-6-like isoformX2 from Branchiostoma belcheri (XP019622811.1), fucolectin-6from Larimichthys crocea (KKF09244.1), fucolectin-6 from Anguilla Anguilla (BAB03528.1), f-type lectinfrom Lateolabrax japonicus (ABI48893.1), furrowed from Drosophila melanogaster (NP511136.2), bindinfrom Crassostrea sikamea (ADD71693.1), and f-type lectin 1 from Pinctada fucata (AFO64339.2). The aminoacid sequences conserved with identity over 60% were shaded in dark, and the similar amino acids wereshaded in grey. The motif h2DGx was marked in blue box, and the fucose binding motif HX26RXDX4[R/K]was marked in red box.在進(jìn)化樹中，如圖 3-3 所示，AjFL-1 首先與文昌魚的巖藻糖凝集素 6 聚成一簇。其次

圖 3-3 AjFL-1 氨基酸序列的進(jìn)化樹分析注：AjFL-1 用黑色三角形標(biāo)出。Fig.3-3 Phylogenetic analysis of the AjFL-1 with fucolectins from other species.AjFL-1 was marked with▲. Sequences other than multiple sequence alignments also including fucolectin fromMorone Saxatilis (3CQOC).3.1.3 組織分布和燦爛弧菌刺激后的表達(dá)模式的變化檢測(cè) AjFL-1 的 mRNA 的組織特異性分布及其對(duì)病原菌刺激后的免疫響應(yīng)，將幫助我們更好的揭示 F-型凝集素在刺參體內(nèi)所發(fā)揮的免疫功能。在目前的研究中，使用 Cytb 作為內(nèi)參，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測(cè)。如圖 3-4 結(jié)果所示，AjFL-1 廣泛表達(dá)于刺參的各個(gè)組織，但是存在組織特異性表達(dá)。其中體壁中表達(dá)量最高；其次為管足、呼吸樹、體腔液和腸；縱肌和性腺中表達(dá)較微弱，這與之前的相關(guān)報(bào)道類似[31, 74, 75]。血細(xì)胞在無脊椎動(dòng)物固有免疫反應(yīng)中起關(guān)鍵作用，很多免疫相關(guān)基因在血細(xì)胞中高表達(dá)且發(fā)揮其功能。因?yàn)轶w腔液是刺參免疫防御的主要組織，所以我們進(jìn)一步檢測(cè)了經(jīng)燦爛

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]內(nèi)源酶在刺參腸自溶中的作用及寡肽抗氧化活性研究[D]. 段秀紅.大連工業(yè)大學(xué) 2014
[2]刺參半胱氨酸蛋白酶抑制劑基因的克隆、原核表達(dá)及其在自溶中的變化規(guī)律研究[D]. 張蕊.大連工業(yè)大學(xué) 2014
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本文編號(hào)：3067735