動植物油脂均以甘油三脂的形式廣泛存在于動植物體內和自然環(huán)境中,同時也是環(huán)境水體油污染的重要組分。當今社會,由于餐廚垃圾等生活垃圾排放量的逐年遞增,餐飲廢棄油脂的降解處理和相應的環(huán)境問題的治理越來越受到重視。在一些生物體內,甘油三酯經(jīng)過酯酶降解后,可以通過乙醛酸途徑轉化為琥珀酸,從而進入其他生物大分子的生成代謝途徑。因此,獲得乙醛酸循環(huán)關鍵酶基因就成為構建油脂單一碳源高效降解菌株的關鍵。本研究從山西屠宰場污水排放處的污泥中,富集篩選得到一株具有油脂降解能力的菌株,其生理生化鑒定和16SrRNA基因序列同源性分析表明,實驗菌株為一株革蘭氏陰性菌,屬于無色桿菌屬（Achromobacter sp.）。通過使用紫外分光光度儀和液相色譜儀測定菌株的降解特性,結果表明:（1）實驗菌株在72h左右對橄欖油的降解率可以達到85%。（2）菌株降解油脂的最適pH條件為7.5,最適溫度條件為35℃。（3）菌株可以在pH值低于9的堿性環(huán)境中保持較高降解率,同時對低于40g/L的鹽濃度具有耐受性。通過同源克隆得到了關鍵酶異檸檬酸裂解酶和蘋果酸合酶基因序列,生物信息學分析結果表明:（1）異檸檬酸裂解酶和蘋果酸合酶... 

【文章來源】：中國農業(yè)科學院北京市

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【學位級別】：碩士

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各菌株對橄欖油降解率

中國農業(yè)科學院碩士學位論文第二章油脂降解菌株的篩選及鑒定9M圖2-216sRNA提取結果電泳圖Fig.2-2Electrophoresisof16SRNAextractionresults實驗菌株16SrRNA基因序列測序結果在NCBI上比對分析，部分分析結果見于表2-3，從分析結果可以看出，與YZ-3菌株的16SrRNA基因序列比對相似性較高的菌株均屬于Achromobactersp。由系統(tǒng)發(fā)育樹（圖2-3）可以看出，與實驗菌株聚為一支的菌屬為Achromobacterpulmonis，結合Biolog試驗分析結果，推斷YZ-3實驗菌株為一株無色桿菌（Achromobactersp.）并將其編號為fd-1。表2-3實驗菌株16SrRNA基因序列的BLAST分析部分結果Table2-3TheBLASTanalysisresultof16SrRNAgenesequenceBacteriumstrainsSequenceID.IdentityAchromobacterpulmonisstrainR-16442NR_117644.11419/1427(99%)AchromobacterinsuavisstrainLMG26845NR_117706.11412/1427(99%)AchromobacterxylosoxidansstrainHugh2838NR_044925.11411/1427(99%)AchromobacterdolensstrainLMG26840NR_117709.11410/1427(99%)AchromobacterxylosoxidansstrainNBRC15126NR_113733.11414/1427(99%)20001000750500

中國農業(yè)科學院碩士學位論文第三章油脂降解菌株的降解特性11第三章油脂降解菌株的降解特性3.1材料與方法3.1.1實驗材料與試劑3.1.1.1實驗儀器高效液相色譜儀（Angilent公司）3.1.1.2實驗藥品正己烷、橄欖油、乙腈、異丙醇、氫氧化鈉、鹽酸、氯化鈉、花生油、大豆油、芝麻油、豬油。3.1.2實驗方法3.1.2.1液相色譜檢測方法建立使用布氏漏斗過濾乙腈和異丙醇作為液相色譜檢測的流動相，首先以橄欖油標準品和甘油標準品確定檢測方法以及兩者的出峰時間范圍與大致峰形，隨后通過繪制濃度-峰面積標準曲線。最終確定液相色譜檢測參數(shù)為：流動相：乙腈：異丙醇（V:V）=1:1，上樣量為5uL，流速0.8mL/min，柱溫30℃。使用的色譜柱為ZorbaxEclipsePlusC18，通過極管陣列復合波長檢測器進行檢測，檢測波長為293nm。標準品橄欖油在此液相色譜條件下的色譜圖如圖3-1所示，橄欖油標準品的濃度-峰面積標準曲線以及標準方程如圖。圖3-1標準品橄欖油的液相色譜圖Fig.3-1Liquidchromatogramofstandardoliveoil


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