雄性動物睪丸的大小可在一定程度上影響其射精量以及精子發(fā)生的有序進(jìn)行,對雄性動物的繁殖能力具有重要的作用。microRNA（miRNA）是一類調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄后水平基因表達(dá)的內(nèi)源性非編碼RNA,在睪丸發(fā)育和精子發(fā)生過程中起重要調(diào)節(jié)作用。本課題組前期采用RNA-seq技術(shù)在不同發(fā)育階段的豬睪丸組織中鑒定出374個miRNA,發(fā)現(xiàn)miR-499在沙子嶺豬性成熟前后的睪丸組織中差異表達(dá)。本研究綜合利用多種分子實(shí)驗(yàn)技術(shù)于細(xì)胞水平研究了miR-499及其靶基因PTEN通過PI3K/AKT信號通路對豬未成熟支持細(xì)胞增殖和凋亡的作用,以期為提高雄性動物的繁殖能力提供理論依據(jù)。研究結(jié)果如下:（1）miR-499靶向調(diào)控PTEN基因在豬未成熟支持細(xì)胞中的表達(dá)根據(jù)miR-499靶基因預(yù)測信息,構(gòu)建了pmirGLO-PTEN-3′UTR-WT/MUT載體,并與miR-499 mimic和mimic NC進(jìn)行豬未成熟支持細(xì)胞的共轉(zhuǎn)染,檢測熒光素酶活性。結(jié)果顯示,miR-499 mimic+pmirGLO-PTEN-3′UTR-WT共轉(zhuǎn)染組的熒光活性極顯著低于其它三組（P<0.01）,表明miR-499可靶向PTE... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

精子在睪丸組織中的發(fā)生過程[10]

18圖1靶基因PTEN結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測Fig1TargetgenePTENbindingsiteprediction將pmirGLO-PTEN-WT/MUT和miR-499mimic/mimicNC共轉(zhuǎn)染至豬未成熟支持細(xì)胞中，檢測細(xì)胞熒光素酶活性。結(jié)果如圖2所示，當(dāng)miR-499mimic/mimicNC分別與pmirGLO-PTEN-WT/MUT共轉(zhuǎn)染時，pmirGLO-PTEN-WT+miR-499mimic組熒光素酶活性極顯著低于pmirGLO-PTEN-WT+NC組(P<0.01)，而pmirGLO-PTEN-MUT+miR-499mimic組與pmirGLO-PTEN-MUT+NC組熒光素酶活性無顯著差異（P>0.05）。結(jié)果表明，miR-499能夠靶向PTEN基因3′UTR預(yù)測結(jié)合位點(diǎn)處。圖2熒光素酶活性檢測結(jié)果Fig2Detectionresultsofluciferaseactivity2.2miR-499抑制PTEN基因在豬未成熟支持細(xì)胞中的表達(dá)在進(jìn)行miR-499過表達(dá)和抑制表達(dá)實(shí)驗(yàn)之前，我們先對miR-499mimic和miR-499inhibitor的轉(zhuǎn)染效率進(jìn)行了檢測，結(jié)果如圖3所示，轉(zhuǎn)染miR-499mimic后miR-499表達(dá)量顯著高于陰性對照組（P<0.05）（圖A），轉(zhuǎn)染miR-499inhibitor后miR-499

18圖1靶基因PTEN結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測Fig1TargetgenePTENbindingsiteprediction將pmirGLO-PTEN-WT/MUT和miR-499mimic/mimicNC共轉(zhuǎn)染至豬未成熟支持細(xì)胞中，檢測細(xì)胞熒光素酶活性。結(jié)果如圖2所示，當(dāng)miR-499mimic/mimicNC分別與pmirGLO-PTEN-WT/MUT共轉(zhuǎn)染時，pmirGLO-PTEN-WT+miR-499mimic組熒光素酶活性極顯著低于pmirGLO-PTEN-WT+NC組(P<0.01)，而pmirGLO-PTEN-MUT+miR-499mimic組與pmirGLO-PTEN-MUT+NC組熒光素酶活性無顯著差異（P>0.05）。結(jié)果表明，miR-499能夠靶向PTEN基因3′UTR預(yù)測結(jié)合位點(diǎn)處。圖2熒光素酶活性檢測結(jié)果Fig2Detectionresultsofluciferaseactivity2.2miR-499抑制PTEN基因在豬未成熟支持細(xì)胞中的表達(dá)在進(jìn)行miR-499過表達(dá)和抑制表達(dá)實(shí)驗(yàn)之前，我們先對miR-499mimic和miR-499inhibitor的轉(zhuǎn)染效率進(jìn)行了檢測，結(jié)果如圖3所示，轉(zhuǎn)染miR-499mimic后miR-499表達(dá)量顯著高于陰性對照組（P<0.05）（圖A），轉(zhuǎn)染miR-499inhibitor后miR-499


本文編號：3058229