落葉松是重要的造林和經(jīng)濟(jì)樹(shù)種,在經(jīng)濟(jì)和生態(tài)方面起著至關(guān)重要的作用。目前常規(guī)育種手段由于成本高和周期長(zhǎng)等特點(diǎn),使得落葉松生產(chǎn)量無(wú)法滿足社會(huì)需求量。隨著生態(tài)平衡的破壞,在日益惡劣的生存環(huán)境下,提高落葉松的抗逆性顯得尤其重要和迫切。因此,基因工程育種在林木育種中的地位愈發(fā)重要。基于實(shí)驗(yàn)室前期研究,LoERF017基因已在擬南芥中進(jìn)行了功能驗(yàn)證,通過(guò)實(shí)驗(yàn)得出,該基因在擬南芥中具有抗旱性,轉(zhuǎn)基因擬南芥株系抗旱性明顯高于野生型擬南芥。本研究在高效的體細(xì)胞胚誘導(dǎo)體系的基礎(chǔ)上,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)日本落葉松進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,獲得了轉(zhuǎn)基因植株。并對(duì)其進(jìn)行抗逆性分析。主要獲得以下研究成果:（1）對(duì)該基因進(jìn)行亞細(xì)胞定位,結(jié)果顯示LoERF017基因定位于細(xì)胞核中。熒光定量PCR結(jié)果表明,該基因在根中的表達(dá)量最高,在莖中的表達(dá)量最低,在葉中的表達(dá)量居中。干旱脅迫下,LoERF017基因的表達(dá)量在根中呈上升趨勢(shì),復(fù)水后,該基因的表達(dá)量有下降趨勢(shì)。（2）轉(zhuǎn)基因落葉松再生植株的獲得。以日本落葉松胚性愈傷組織為受體材料,通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法在日本落葉松中進(jìn)行LoERF017基因的遺傳轉(zhuǎn)化,共獲得3個(gè)抗性愈傷,對(duì)轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行D... 

【文章來(lái)源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1. 緒論
    1.1. 落葉松簡(jiǎn)介
    1.2. 針葉樹(shù)體細(xì)胞胚研究進(jìn)展
        1.2.1. 針葉樹(shù)體細(xì)胞胚的研究進(jìn)展
        1.2.2. 針葉樹(shù)體細(xì)胞胚的發(fā)生應(yīng)用
    1.3. 針葉樹(shù)遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展
        1.3.1. 針葉樹(shù)種所采用的遺傳轉(zhuǎn)化方法和研究進(jìn)展
        1.3.2. 針葉樹(shù)遺傳轉(zhuǎn)化的研究應(yīng)用
    1.4. 植物AP2/EREBP轉(zhuǎn)錄因子介紹
        1.4.1 植物AP2/EREBP類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)
        1.4.2 植物ERF類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子功能
    1.5. 研究目的和意義
2. LoERF017基因的克隆及在日本落葉松中的遺傳轉(zhuǎn)化
    2.1. 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1. 植物材料
        2.1.2. 實(shí)驗(yàn)菌株及試劑
        2.1.3. 實(shí)驗(yàn)耗材
        2.1.4. 培養(yǎng)基
    2.2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1. LoERF017基因的克隆
        2.2.2. LoERF017基因在日本落葉松中的表達(dá)模式分析
        2.2.3. 過(guò)表達(dá)載體pCAMBIA1300-LoERF017-GFP構(gòu)建
        2.2.4. pCAMBIA1300-LoERF017-GFP亞細(xì)胞定位
        2.2.5. 胚性愈傷組織的準(zhǔn)備
        2.2.6. 轉(zhuǎn)LoERF017基因胚性愈傷組織的獲得
        2.2.7. 體細(xì)胞胚的成熟與植株再生
        2.2.8. 轉(zhuǎn)LoERF017基因再生植株的分子檢測(cè)
    2.3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1. 長(zhǎng)白落葉松LoERF017基因的克隆
        2.3.2. LoERF017基因在日本落葉松中的表達(dá)模式分析
        2.3.3. 植物表達(dá)載體pCAMBIA1300-LoERF017-GFP的獲得及工程菌的制備
        2.3.4. LoERF017基因的亞細(xì)胞定位
        2.3.5. 胚性愈傷組織的繼代增殖
        2.3.6. 轉(zhuǎn)LoERF017基因日本落葉松胚性愈傷組織的獲得
        2.3.7. 轉(zhuǎn)基因植株的獲得
        2.3.8. 轉(zhuǎn)LoERF017基因落葉松再生植株的分子水平檢測(cè)
    2.4. 本章小結(jié)
3. 轉(zhuǎn)LoERF017基因落葉松抗逆性分析
    3.1. 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1. 植物材料
        3.1.2. 主要藥品及試劑
        3.1.3. 藥品配制
    3.2. 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1. PEG6000脅迫下轉(zhuǎn)基因胚性愈傷組織的增殖情況
        3.2.2. PEG6000脅迫處理落葉松苗
        3.2.3. 組織化學(xué)染色
        3.2.4. 生理指標(biāo)的測(cè)定
    3.3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1. PEG6000脅迫下轉(zhuǎn)基因胚性愈傷組織的增殖情況
        3.3.2. PEG6000脅迫下轉(zhuǎn)基因落葉松植株生長(zhǎng)情況
        3.3.3. 組織化學(xué)染色結(jié)果
        3.3.4. PEG6000脅迫下轉(zhuǎn)基因落葉松生理指標(biāo)測(cè)定
    3.4. 本章小結(jié)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3055554