鹿茸是哺乳動(dòng)物中極為特殊的骨質(zhì)器官,它以驚人的生長速度發(fā)揮其周期性再生的能力,并且通過割茸創(chuàng)傷的無疤痕愈合,展現(xiàn)了其強(qiáng)大的免疫功能,使之成為各科研領(lǐng)域廣為推崇的研究模型。鹿茸的發(fā)生與再生是多方面因素的合力所共同實(shí)現(xiàn)的,迄今為止,人們尚未能完全破解鹿茸發(fā)育的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。轉(zhuǎn)化生長因子β（transforming growth factorβ,TGF-β）是一類多功能的生長因子,對(duì)細(xì)胞具有復(fù)雜的調(diào)控作用。已有研究表明,TGF-β及其受體在鹿茸頂端有大量表達(dá),但其功能性研究卻少有報(bào)道。因此,探究TGF-β在鹿茸快速生長階段的重要作用成為本研究的主要目的。本研究利用生物信息學(xué)軟件,對(duì)克隆得到的梅花鹿TGF-β1基因核苷酸序列及氨基酸序列相似性百分率、基因編碼蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)、翻譯后修飾位點(diǎn)及蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了預(yù)測,通過免疫組化分析了TGF-β1在鹿茸頂端不同組織的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度,表明TGF-β1在軟骨層中表達(dá)水平最高,其次為間充質(zhì)層和真皮層。為探究TGF-β1在鹿茸軟骨細(xì)胞中的功能,本試驗(yàn)利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)敲除鹿茸軟骨細(xì)胞中的TGF-β1基因。首先,針對(duì)梅花鹿TGF-β1序列... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

TGF-β/Smad信號(hào)通路圖

位點(diǎn)對(duì) pre-crRNA 進(jìn)行加工。另外，CnsⅠ和 RNase Ⅲ核酸酶也參與 pre-crR剪切過程[67]。目前的 CRISPR/Cas9 通常用人工設(shè)計(jì)的 gRNA（guide RNANA/crRNA復(fù)合物，從而將CRISPR/Cas9系統(tǒng)簡化成Cas9蛋白和gRNA兩個(gè)組RISPR/Cas9 的作用機(jī)理可分為三個(gè)階段：適應(yīng)、表達(dá)和干擾[69, 70]（圖 3.1）侵時(shí)，CRISPR/Cas 系統(tǒng)首先產(chǎn)生與靶序列對(duì)應(yīng)的 RNA 序列，該序列識(shí)別病 PAM 區(qū)，并與其 DNA 互補(bǔ)結(jié)合，在前導(dǎo)序列的啟動(dòng)下，轉(zhuǎn)錄形成 pre-crrRNA借助tracrRNA、CnsⅠ、RNaseⅢ和Cas9蛋白，經(jīng)過兩步剪切，成為成熟的c crRNA 先與 tracrRNA 上部分互補(bǔ)的區(qū)域形成雙鏈 RNA，再與 Cas9 蛋白結(jié)核糖核蛋白復(fù)合物（CRISPR ribonu-cleoprotein，crRNP）。crRNA 能夠與外異性地結(jié)合，并將 DNA 雙鏈解開，形成 R 環(huán)結(jié)構(gòu)，使 crRNA 與互補(bǔ)鏈雜交Cas 內(nèi)切酶在特異位點(diǎn)完成對(duì)基因組的精確切割，形成 DNA 雙鏈斷裂（double, DSB）。最終，發(fā)生 DSB 的 DNA 則利用細(xì)胞自身的修復(fù)機(jī)制，對(duì) DNA 進(jìn)[71, 72]。

1.1 總 RNA 的瓊脂糖凝膠電rose gel electrophoresisPCR 擴(kuò)增結(jié)果A 為模板，通過 PCR 擴(kuò)p 左右的位置出現(xiàn)特異性1,0800 bp00 bp50 bp00 bp50 bp00 bpM 1

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3053172