茯苓（Wolfiporia cocos）是一種藥食兩用真菌,以干燥菌核入藥,具有健脾和胃、滲水利濕、寧心安神等功效。其中茯苓酸是其主要質(zhì)量指標(biāo)成分和醫(yī)藥活性成分。在我國(guó)藥用歷史悠久,始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,謂中藥中之上品。大量藥理學(xué)研究表明茯苓酸具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化作用,以及降血糖、鎮(zhèn)靜等功效。目前砍伐松木作為培養(yǎng)料栽培茯苓,隨著茯苓需求量的增加對(duì)森林資源的消耗日益嚴(yán)重,茯苓生產(chǎn)和森林保護(hù)的矛盾日益尖銳。運(yùn)用生物工程技術(shù),通過(guò)茯苓菌絲發(fā)酵來(lái)生產(chǎn)茯苓酸以及代料栽培茯苓成為茯苓產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展新途徑。而研究茯苓酸的生物合成途徑及代謝調(diào)控為使用生物工程技術(shù)和代料栽培技術(shù)生產(chǎn)茯苓或茯苓有效成分提供理論基礎(chǔ)。本研究在運(yùn)用液相色譜-質(zhì)譜定性分析茯苓菌核中三萜類(lèi)物質(zhì)成分的基礎(chǔ)上,根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)式,推導(dǎo)出了茯苓酸可能的生物合成途徑。根據(jù)該途徑,結(jié)合本課題組前期進(jìn)行的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及參考已公布的茯苓基因組數(shù)據(jù)庫(kù)及KEGG、NCBI等公共數(shù)據(jù)庫(kù),注釋到了相關(guān)的催化酶及編碼基因。其中注釋到Wcsoat可能催化土莫酸生成最終產(chǎn)物茯苓酸。本研究針對(duì)該基因,在轉(zhuǎn)錄組測(cè)序獲得基因片段基礎(chǔ)上,克隆得到了該基因全長(zhǎng),并進(jìn)行... 

【文章來(lái)源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：93 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CYP5150L8介導(dǎo)的靈芝酸C26位氧化過(guò)程

茯苓甾醇氧乙酰基轉(zhuǎn)移酶基因的克隆及功能分析分布、代謝與排泄系統(tǒng)研究，對(duì)于茯苓酸用于癌癥等病的的功能研究進(jìn)展乙�；D(zhuǎn)移酶在動(dòng)物、植物、微生物中均存在的一種�；� A 作為乙�；w，轉(zhuǎn)移到甾醇類(lèi)物質(zhì)，形成酯化甾是一種多跨膜結(jié)合蛋白，序列分析顯示蛋白屬于膜結(jié)合氧OAT, membrane-bound O-acyltransferase family）（J. G. Heil 1984, K. E. Suckling, E. F. Stange et al 1985）。在煙曲乙�；D(zhuǎn)移酶 HelD1 和 HelD2 參與煙曲霉酸的生物合成羥基乙酰基化（Hisashi and Mitsuguchi 2009）。

圖 1-3 AtsAT1 在甾醇生物合成途徑中的作用Fig. 1-3 A role for AtsAT1 in the sterol biosynthesis pathway課題研究目的及意義研究將有利于進(jìn)一步揭示茯苓質(zhì)量形成規(guī)律，為茯苓菌種定向培育及茯苓栽培奠定理論基礎(chǔ)。擬利用分子生物手段，通過(guò)將編碼甾醇氧乙酰基轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)化到酵母中進(jìn)行表達(dá)，研究其編碼的蛋白質(zhì)的功能，將Wcsoat整合到含有抗性基因的超表達(dá)載體中，采用PEG介導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法將超表達(dá)載體轉(zhuǎn)苓中，觀察Wcsoat表達(dá)量、茯苓酸合成量以及菌絲形態(tài)差異，為揭示W(wǎng)cso生物酸合成途徑中的功能提供依據(jù)。從而為最終利用生物工程工業(yè)化生產(chǎn)實(shí)現(xiàn)茯苓產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展奠定一定的理論基礎(chǔ)。同時(shí)本研究的研究思還可以為研究其它次生代謝產(chǎn)物的生物合成途徑提供借鑒和參考。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]基于LC-MSn和基因轉(zhuǎn)錄組分析的白茯苓、茯苓皮三萜酸類(lèi)成分差異及機(jī)理研究[D]. 王維皓.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院 2015

碩士論文
[1]甘蔗原生質(zhì)體的融合及雜核細(xì)胞再生條件的優(yōu)化[D]. 宋亞妮.廣西大學(xué) 2018
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