發(fā)布時間：2021-02-24 15:01

　　茯苓（Wolfiporia cocos）是一種藥食兩用真菌,以干燥菌核入藥,具有健脾和胃、滲水利濕、寧心安神等功效。其中茯苓酸是其主要質(zhì)量指標成分和醫(yī)藥活性成分。在我國藥用歷史悠久,始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,謂中藥中之上品。大量藥理學研究表明茯苓酸具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化作用,以及降血糖、鎮(zhèn)靜等功效。目前砍伐松木作為培養(yǎng)料栽培茯苓,隨著茯苓需求量的增加對森林資源的消耗日益嚴重,茯苓生產(chǎn)和森林保護的矛盾日益尖銳。運用生物工程技術,通過茯苓菌絲發(fā)酵來生產(chǎn)茯苓酸以及代料栽培茯苓成為茯苓產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展新途徑。而研究茯苓酸的生物合成途徑及代謝調(diào)控為使用生物工程技術和代料栽培技術生產(chǎn)茯苓或茯苓有效成分提供理論基礎。本研究在運用液相色譜-質(zhì)譜定性分析茯苓菌核中三萜類物質(zhì)成分的基礎上,根據(jù)其化學結構式,推導出了茯苓酸可能的生物合成途徑。根據(jù)該途徑,結合本課題組前期進行的轉(zhuǎn)錄組測序及參考已公布的茯苓基因組數(shù)據(jù)庫及KEGG、NCBI等公共數(shù)據(jù)庫,注釋到了相關的催化酶及編碼基因。其中注釋到Wcsoat可能催化土莫酸生成最終產(chǎn)物茯苓酸。本研究針對該基因,在轉(zhuǎn)錄組測序獲得基因片段基礎上,克隆得到了該基因全長,并進行... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

CYP5150L8介導的靈芝酸C26位氧化過程

茯苓甾醇氧乙�；D(zhuǎn)移酶基因的克隆及功能分析分布、代謝與排泄系統(tǒng)研究，對于茯苓酸用于癌癥等病的的功能研究進展乙�；D(zhuǎn)移酶在動物、植物、微生物中均存在的一種�；� A 作為乙�；w，轉(zhuǎn)移到甾醇類物質(zhì)，形成酯化甾是一種多跨膜結合蛋白，序列分析顯示蛋白屬于膜結合氧OAT, membrane-bound O-acyltransferase family）（J. G. Heil 1984, K. E. Suckling, E. F. Stange et al 1985）。在煙曲乙�；D(zhuǎn)移酶 HelD1 和 HelD2 參與煙曲霉酸的生物合成羥基乙�；℉isashi and Mitsuguchi 2009）。

圖 1-3 AtsAT1 在甾醇生物合成途徑中的作用Fig. 1-3 A role for AtsAT1 in the sterol biosynthesis pathway課題研究目的及意義研究將有利于進一步揭示茯苓質(zhì)量形成規(guī)律，為茯苓菌種定向培育及茯苓栽培奠定理論基礎。擬利用分子生物手段，通過將編碼甾醇氧乙�；D(zhuǎn)移轉(zhuǎn)化到酵母中進行表達，研究其編碼的蛋白質(zhì)的功能，將Wcsoat整合到含有抗性基因的超表達載體中，采用PEG介導的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法將超表達載體轉(zhuǎn)苓中，觀察Wcsoat表達量、茯苓酸合成量以及菌絲形態(tài)差異，為揭示W(wǎng)cso生物酸合成途徑中的功能提供依據(jù)。從而為最終利用生物工程工業(yè)化生產(chǎn)實現(xiàn)茯苓產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展奠定一定的理論基礎。同時本研究的研究思還可以為研究其它次生代謝產(chǎn)物的生物合成途徑提供借鑒和參考。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]不對稱滅活原生質(zhì)體融合技術選育川丁特羅高效轉(zhuǎn)化菌株[J]. 王雨琪,林涵,陳羽,鞏庚,徐威.  中國醫(yī)藥工業(yè)雜志. 2019(02)
[2]柑橘潰瘍病相關基因CsPGIP的克隆與表達[J]. 胡安華,祁靜靜,張慶雯,陳善春,鄒修平,許蘭珍,彭愛紅,雷天剛,姚利曉,龍琴,何永睿,李強.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2019(04)
[3]利用原生質(zhì)體融合構建競爭結瘤能力強且耐酸性固氮菌[J]. 王金生,王君,吳俊江,劉慶莉,王樹林,張鑫,魏嵐嵐.  大豆科學. 2018(06)
[4]tuf基因同源超表達對植物乳桿菌LR-1生理行為的影響[J]. 劉蕾,厙曉,錢楊,李婭琳,聶蓉,饒瑜.  食品科學. 2019(08)
[5]利用原生質(zhì)體誘變方法選育蛹蟲草高產(chǎn)突變菌株[J]. 劉紅,馬輝,毛利容,李陽鳴,張?zhí)?包建忠,陳秀蘭,孫葉.  蠶業(yè)科學. 2018(03)
[6]電擊法轉(zhuǎn)化金針菇菌絲碎片表達報告基因eGFP及GUS的研究[J]. 劉建雨,張美彥,張丹,徐珍,宋春艷,李巧珍,尚曉冬,譚琦,黃志勇,胡衛(wèi)紅,張引芳,趙靜,王瑞娟.  食用菌學報. 2018(02)
[7]茯苓菌絲體、菌核、子實體及茯苓皮中總萜含量比較[J]. 鄧波俠,姚川威,鄒娟,劉勝貴,胡興.  懷化學院學報. 2018(05)
[8]畢赤酵母高效表達外源蛋白的相關策略及研究進展[J]. 朱文,胡又佳,謝麗萍.  中國醫(yī)藥工業(yè)雜志. 2018(04)
[9]茯苓酸對血管緊張素Ⅱ誘導的H9c2細胞肥大和凋亡的影響及其機制的研究[J]. 袁園,李芳芳,吳青青,唐其柱.  廣西醫(yī)學. 2018(06)
[10]農(nóng)桿菌介導的Cas9基因轉(zhuǎn)化金針菇的研究[J]. 劉建雨,劉建輝,張丹,徐珍,王瑞娟,楊慧,于海龍,尚曉冬.  食用菌學報. 2017(03)

博士論文
[1]基于LC-MSn和基因轉(zhuǎn)錄組分析的白茯苓、茯苓皮三萜酸類成分差異及機理研究[D]. 王維皓.中國中醫(yī)科學院 2015

碩士論文
[1]甘蔗原生質(zhì)體的融合及雜核細胞再生條件的優(yōu)化[D]. 宋亞妮.廣西大學 2018
[2]茯苓羊毛甾醇合酶基因PcLSS克隆及其功能驗證[D]. 周振.華中農(nóng)業(yè)大學 2017
[3]茯苓甾醇C-24甲基轉(zhuǎn)移酶基因克隆與功能驗證[D]. 郭繼云.華中農(nóng)業(yè)大學 2017
[4]茯苓酸對胃癌治療機制的研究[D]. 白要飛.西北農(nóng)林科技大學 2017
[5]PEG介導玉米葉肉細胞原生質(zhì)體瞬時基因轉(zhuǎn)化體系的應用研究[D]. 張齡丹.安徽農(nóng)業(yè)大學 2016
[6]茯苓遺傳多樣性和轉(zhuǎn)化技術的研究[D]. 孫巧.武漢輕工大學 2015
[7]靈芝轉(zhuǎn)化體系的建立與調(diào)節(jié)免疫蛋白的超表達[D]. 孫墨可.吉林農(nóng)業(yè)大學 2014
[8]人參大片段DNA（100kb）轉(zhuǎn)化靈芝的研究[D]. 逄春梅.吉林農(nóng)業(yè)大學 2012
[9]糙皮側耳Po.Hyd基因超表達載體的構建及轉(zhuǎn)化研究[D]. 黃茜.華中農(nóng)業(yè)大學 2011
[10]茯苓原生質(zhì)體融合育種及其發(fā)酵動力學研究[D]. 劉宇邈.河南大學 2011



本文編號：3049547