目的:1、檢測(cè)慢病毒載體介導(dǎo)的大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶/單純皰疹病毒胸苷激酶（CD/TK）雙自殺基因在大鼠乳腺癌SHZ-88細(xì)胞中的表達(dá)情況和對(duì)乳腺癌細(xì)胞的殺傷效應(yīng)與旁觀者效應(yīng)。2、評(píng)估經(jīng)動(dòng)脈灌注重組慢病毒轉(zhuǎn)染SD大鼠游離腹壁淺動(dòng)脈穿支（SIEA）皮瓣后CD/TK基因在皮瓣內(nèi)的表達(dá)情況。3、探討CD/TK雙自殺基因過(guò)表達(dá)慢病毒體系聯(lián)合前藥5-氟胞嘧啶與更昔洛韋（5-FC+GCV）對(duì)大鼠乳腺癌移植瘤生長(zhǎng)的抑制情況。4、探討游離皮瓣在感染CD/TK雙自殺基因過(guò)表達(dá)慢病毒體系后是否會(huì)產(chǎn)生全身性的毒副反應(yīng)。方法:1、將擴(kuò)增后的載體質(zhì)粒（目的質(zhì)粒或空載質(zhì)粒）、慢病毒包裝質(zhì)粒與包膜質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293T感受態(tài)細(xì)胞,收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液,將細(xì)胞上清液高速離心以濃縮純化病毒,將濃縮的慢病毒10倍梯度稀釋后感染HEK 293T細(xì)胞,觀察細(xì)胞中綠色熒光蛋白（GFP）的表達(dá)情況,根據(jù)下列公式計(jì)算重組慢病毒的滴度:病毒滴度=表達(dá)熒光蛋白的細(xì)胞數(shù)/病毒原液量。2、分別將不同感染復(fù)數(shù)（MOI）的LV-CD/TK與LV-GFP重組慢病毒感染SHZ-88細(xì)胞,測(cè)定慢病毒對(duì)細(xì)胞的感染效率;采用CCK-8檢測(cè)感染... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：120 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
引言
第一部分 慢病毒介導(dǎo)的CD/TK雙自殺基因在SHZ-88乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)與作用
    第一章 CD/TK雙自殺基因過(guò)表達(dá)慢病毒體系的構(gòu)建
        —.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        二.技術(shù)路線
        三.實(shí)驗(yàn)材料
        四.慢病毒包裝系統(tǒng)信息
        五.實(shí)驗(yàn)方法
        六.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        七.實(shí)驗(yàn)討論
        八.實(shí)驗(yàn)結(jié)論
    第二章 CD/TK雙自殺基因過(guò)表達(dá)慢病毒體系在SHZ-88乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)、直接殺傷效應(yīng)與旁觀者效應(yīng)
        一.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        二.技術(shù)路線
        三.實(shí)驗(yàn)材料
        四.實(shí)驗(yàn)方法
        五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        六、討論
        七、結(jié)論
第二部分 慢病毒介導(dǎo)的CD/TK雙自殺基因經(jīng)動(dòng)脈灌注轉(zhuǎn)染大鼠游離的SIEA皮瓣對(duì)乳腺癌移植瘤的影響
    第一章 SD大鼠SIEA皮瓣的解剖灌注與乳腺癌移植瘤模型的建立
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)">        一_實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        二.實(shí)驗(yàn)材料
        三.實(shí)驗(yàn)方法
        四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        五、討論
        六、結(jié)論
    第二章 經(jīng)動(dòng)脈灌注的CD/TK雙自殺基因過(guò)表達(dá)慢病毒體系轉(zhuǎn)染大鼠游離的SIEA皮瓣對(duì)乳腺癌移植瘤的影響
        一.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        二.技術(shù)路線
        三.實(shí)驗(yàn)材料
        四.實(shí)驗(yàn)方法
        五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        六、討論
        七、結(jié)論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
英文縮略詞及中英文對(duì)照索引
附錄
    附錄一 附圖
    附錄二 附表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大鼠腹壁淺動(dòng)脈穿支皮瓣的解剖學(xué)[J]. 方冬,林海雙,余豐,章思芳,丁茂超,崔懷瑞,唐茂林,徐達(dá)傳.  解剖學(xué)報(bào). 2014(04)
[2]攜帶人VE-cadherin基因的慢病毒載體的構(gòu)建及其在Sup-B15白血病細(xì)胞株的表達(dá)[J]. 張煥新,陳翀,曾令宇,閆志凌,李振宇,徐開(kāi)林.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2011(03)
[3]Construction and identification of recombinant lentiviral vector containing HIV-1 Tat gene and its expression in 293T cells[J]. Bingbing Wei a ,Ninghan Feng a ,Feng Zhou b ,Chun Lu b ,Jiantang Su a ,Lixin Hua a a Department of Urology,the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University,Nanjing 210029,China b Department of Microbiology and Immunology,Nanjing Medical University,Nanjing 210029,China.  Journal of Biomedical Research. 2010(01)
[4]慢病毒載體介導(dǎo)綠色熒光蛋白基因在小鼠T淋巴細(xì)胞中的表達(dá)[J]. 李振宇,徐開(kāi)林,潘秀英,孫海英,高飛,鹿群先,李德鵬,何徐彭.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2007(01)
[5]大豆異黃酮對(duì)大鼠乳腺癌細(xì)胞內(nèi)cAMP/PKA信號(hào)途徑的影響[J]. 林成招,馬海田,鄒思湘,王國(guó)杰,陳偉華,韓正康.  生理學(xué)報(bào). 2005(04)
[6]抗癌藥物動(dòng)脈灌注對(duì)局部軸型皮瓣血供的影響[J]. 王肅生,冀航,梁剛,張志華,丁海曙.  中華生物醫(yī)學(xué)工程雜志. 2007 (01)

博士論文
[1]經(jīng)動(dòng)脈灌注LV-mIL12轉(zhuǎn)染大鼠帶蒂SIEA皮瓣對(duì)在體乳腺癌SHZ-88細(xì)胞生長(zhǎng)影響的研究[D]. 崔雅寧.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2012



本文編號(hào)：3049254