目的:1、檢測慢病毒載體介導的大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶/單純皰疹病毒胸苷激酶（CD/TK）雙自殺基因在大鼠乳腺癌SHZ-88細胞中的表達情況和對乳腺癌細胞的殺傷效應與旁觀者效應。2、評估經(jīng)動脈灌注重組慢病毒轉(zhuǎn)染SD大鼠游離腹壁淺動脈穿支（SIEA）皮瓣后CD/TK基因在皮瓣內(nèi)的表達情況。3、探討CD/TK雙自殺基因過表達慢病毒體系聯(lián)合前藥5-氟胞嘧啶與更昔洛韋（5-FC+GCV）對大鼠乳腺癌移植瘤生長的抑制情況。4、探討游離皮瓣在感染CD/TK雙自殺基因過表達慢病毒體系后是否會產(chǎn)生全身性的毒副反應。方法:1、將擴增后的載體質(zhì)粒（目的質(zhì)�；蚩蛰d質(zhì)粒）、慢病毒包裝質(zhì)粒與包膜質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293T感受態(tài)細胞,收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液,將細胞上清液高速離心以濃縮純化病毒,將濃縮的慢病毒10倍梯度稀釋后感染HEK 293T細胞,觀察細胞中綠色熒光蛋白（GFP）的表達情況,根據(jù)下列公式計算重組慢病毒的滴度:病毒滴度=表達熒光蛋白的細胞數(shù)/病毒原液量。2、分別將不同感染復數(shù)（MOI）的LV-CD/TK與LV-GFP重組慢病毒感染SHZ-88細胞,測定慢病毒對細胞的感染效率;采用CCK-8檢測感染... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
引言
第一部分 慢病毒介導的CD/TK雙自殺基因在SHZ-88乳腺癌細胞中的表達與作用
    第一章 CD/TK雙自殺基因過表達慢病毒體系的構(gòu)建
        —.實驗設(shè)計
        二.技術(shù)路線
        三.實驗材料
        四.慢病毒包裝系統(tǒng)信息
        五.實驗方法
        六.實驗結(jié)果
        七.實驗討論
        八.實驗結(jié)論
    第二章 CD/TK雙自殺基因過表達慢病毒體系在SHZ-88乳腺癌細胞中的表達、直接殺傷效應與旁觀者效應
        一.實驗設(shè)計
        二.技術(shù)路線
        三.實驗材料
        四.實驗方法
        五、實驗結(jié)果
        六、討論
        七、結(jié)論
第二部分 慢病毒介導的CD/TK雙自殺基因經(jīng)動脈灌注轉(zhuǎn)染大鼠游離的SIEA皮瓣對乳腺癌移植瘤的影響
    第一章 SD大鼠SIEA皮瓣的解剖灌注與乳腺癌移植瘤模型的建立
實驗設(shè)計">        一_實驗設(shè)計
        二.實驗材料
        三.實驗方法
        四、實驗結(jié)果
        五、討論
        六、結(jié)論
    第二章 經(jīng)動脈灌注的CD/TK雙自殺基因過表達慢病毒體系轉(zhuǎn)染大鼠游離的SIEA皮瓣對乳腺癌移植瘤的影響
        一.實驗設(shè)計
        二.技術(shù)路線
        三.實驗材料
        四.實驗方法
        五、實驗結(jié)果
        六、討論
        七、結(jié)論
全文總結(jié)
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
英文縮略詞及中英文對照索引
附錄
    附錄一 附圖
    附錄二 附表
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]大鼠腹壁淺動脈穿支皮瓣的解剖學[J]. 方冬,林海雙,余豐,章思芳,丁茂超,崔懷瑞,唐茂林,徐達傳.  解剖學報. 2014(04)
[2]攜帶人VE-cadherin基因的慢病毒載體的構(gòu)建及其在Sup-B15白血病細胞株的表達[J]. 張煥新,陳翀,曾令宇,閆志凌,李振宇,徐開林.  中國實驗血液學雜志. 2011(03)
[3]Construction and identification of recombinant lentiviral vector containing HIV-1 Tat gene and its expression in 293T cells[J]. Bingbing Wei a ,Ninghan Feng a ,Feng Zhou b ,Chun Lu b ,Jiantang Su a ,Lixin Hua a a Department of Urology,the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University,Nanjing 210029,China b Department of Microbiology and Immunology,Nanjing Medical University,Nanjing 210029,China.  Journal of Biomedical Research. 2010(01)
[4]慢病毒載體介導綠色熒光蛋白基因在小鼠T淋巴細胞中的表達[J]. 李振宇,徐開林,潘秀英,孫海英,高飛,鹿群先,李德鵬,何徐彭.  中國實驗血液學雜志. 2007(01)
[5]大豆異黃酮對大鼠乳腺癌細胞內(nèi)cAMP/PKA信號途徑的影響[J]. 林成招,馬海田,鄒思湘,王國杰,陳偉華,韓正康.  生理學報. 2005(04)
[6]抗癌藥物動脈灌注對局部軸型皮瓣血供的影響[J]. 王肅生,冀航,梁剛,張志華,丁海曙.  中華生物醫(yī)學工程雜志. 2007 (01)

博士論文
[1]經(jīng)動脈灌注LV-mIL12轉(zhuǎn)染大鼠帶蒂SIEA皮瓣對在體乳腺癌SHZ-88細胞生長影響的研究[D]. 崔雅寧.北京協(xié)和醫(yī)學院 2012



本文編號：3049254