發(fā)布時(shí)間：2021-02-22 22:18

　　目的:本研究旨在檢測(cè)隨年齡增長(zhǎng),人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨能力的改變以及細(xì)胞衰老程度;通過(guò)基因芯片技術(shù)檢測(cè)不同年齡組人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞差異基因表達(dá)情況,為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞作為種子細(xì)胞在組織工程臨床轉(zhuǎn)化過(guò)程中提供理論依據(jù)。方法:1.不同年齡組人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSC）收集、培養(yǎng)、鑒定按照年齡分為:胎兒組（fetal-BMSC,20周-24周,n=6）,青年組（young/adult-BMSC,16歲-30歲,n=6）,老年組（old-BMSC,>60歲,n=6）,根據(jù)此年齡分組收集,分離獲得細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物。對(duì)分離所得細(xì)胞進(jìn)行成骨、成脂誘導(dǎo)分化及茜素紅、油紅O染色。2.檢測(cè)不同年齡組人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化能力培養(yǎng)不同年齡組骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,進(jìn)行成骨誘導(dǎo)分化2周,通過(guò)茜素紅染色鑒定間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化能力的變化,用Real-time PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因表達(dá)水平變化。3.不同年齡組人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞衰老程度的比較通過(guò)細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色檢測(cè)不同年齡組人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞衰老程度。通過(guò)Real-time PCR檢測(cè)衰老相關(guān)基因P21、P16表達(dá)變化。... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)干細(xì)胞表面標(biāo)志物

鏡下觀察未見(jiàn)明顯紅色結(jié)節(jié)形成，如下圖所示 。空白對(duì)照組 誘導(dǎo)分化組圖 1-2 成骨誘導(dǎo)茜素紅染色（Bar=100 μm）成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)兩周，鏡下觀察可見(jiàn)，細(xì)胞增殖速率減慢，細(xì)胞逐漸膨大，細(xì)胞形態(tài)從長(zhǎng)梭形轉(zhuǎn)向橢圓形。隨著成脂誘導(dǎo)分化時(shí)間增加，倒置顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)形成的脂滴數(shù)目遞增，后按前所述方式進(jìn)行油紅 O 染色，成脂誘導(dǎo)分化組鏡下可見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)脂滴被染為紅色，而成脂誘導(dǎo)空白對(duì)照組未見(jiàn)明顯脂滴形成，油紅 O 染色未觀察到被染為紅色的脂滴，如下圖所示。

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文1.2.2 分離所得細(xì)胞的成骨、成脂分化能力成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng) 14 天，逐漸開(kāi)始形成鈣化結(jié)節(jié)，伴隨著成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間增加，在顯微鏡下觀察可以發(fā)現(xiàn)鈣化結(jié)節(jié)數(shù)目增加明顯。按前面所述方法進(jìn)行茜素紅染色后，鏡下觀察可見(jiàn)成骨誘導(dǎo)分化組內(nèi)細(xì)胞中形成數(shù)量、形態(tài)大小不等、顏色深淺不等的的紅色結(jié)節(jié)，成骨誘導(dǎo)空白對(duì)照組細(xì)胞茜素紅染色后，鏡下觀察未見(jiàn)明顯紅色結(jié)節(jié)形成，如下圖所示 。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Role of Hox genes in stem cell differentiation[J]. Anne Seifert,David F Werheid,Silvana M Knapp,Edda Tobiasch.  World Journal of Stem Cells. 2015(03)



本文編號(hào)：3046626